Вы здесь

Главная

Особенности биосинтеза субтилизина Bacillus intermedius рекомбинантным штаммом Bacillus subtilis

ID_Статьи: 
92.00

Инициация и развитие спорообразования у бацилл является результатом дифференциальной генной экспрессии. Процесс споруляции длителен по времени и включает ряд последовательных этапов. В этот период материнская клетка продолжает секретировать в среду ряд гидролитических ферментов, среди которых сериновая протеиназа - субтилизин. Тем не менее, остаются неясными вопросы о молекулярном механизме инициации и участие в этом процессе еериновых протеиназ. Подходом к решению проблемы является изучение экспрессии гена субтилизина в штаммах В. subtilis, мутантных по spo-генам.

Настоящее исследование посвящено выяснению особенностей эксрессии в В. subtilis гена субтилизина В. intermedius. Нами показано, что характер кривой накопления фермента в культуральной жидкости, а также основные закономерности синтеза субтилизина B. intermedius сохраняются в рекомбинантных штаммах B. subtilis. Получены два пика протеолитической активности, соответствующие 28 и 48 часам роста. Удельная активность субтилизина возрастает в присутствии в среде казеина (1%) и желатина (0,5%) и резко снижается на среде с глюкозой (1%). Таким образом, синтез тиолзависимого субтилизина регулируется по механизму катаболитной репрессии. Добавление в среду глюкозы (1%) на разные часы роста показало, что ее внесение на 21,24 и 26 часы культивирования приводит к резкому снижению удельной активности фермента в последующие часы роста. Внесение глюкозы в среду начиная с 28 часа роста не вызывает снижения удельной активности, что свидетельствует о том, что протеиназа второго пика не подвергается регуляции со стороны катаболитной репрессии.

Установлено, что экспрессия гена субтилизина в штаммах В. subtilis, дефектных по SpoOA-ключевому регуляторному белку, который активирует транскрипцию спороспецифичных генов, полностью подавляется. Таким образом, белок SpoOA является позитивным регулятором (активатором) экспрессии субтилизина.

 

Кириллова Ю.М., Шайхиев М.С., Шарипова М.Р.

Казанский государственный университет, Казань (Россия, Татарстан)