Вы здесь

Главная

Определение молекулярной природы мутации Rad(201)g1 Drosophila melanogaster методом ПЦР

ID_Статьи: 
28.00

В современных исследованиях проблемы поддержания стабильности эукариотического генома широко используются мутагенчувствительные мутанты, полученные у различных представителей высших эукариотических организмов. Ранее в лаборатории генетики эукариот ОМРБ ПИЯФ у Drosophila melanogaster была выделена мутация rad(201)Gl, вызывающая гиперчувствительность развивающихся мух к ионизирующей радиации. Дальнейшие исследования показали, что в геноме дрозофилы эта мутация нарушает репарацию повреждений ДНК, ведущих к хромосомным разрывам. В результате проведенного физического картирования мутации установлено, что она локализуется в районе 45В1 карты политенных хромосом, где находятся два встречно направленных и перекрывающихся 3'- концами гена: rad201 и Rad51C, конечные продукты которых независимы. На сегодняшний день не выявлено гомологии гена rad201 с другими известными генами репарации, тогда как ген Rad51C относится к наиболее важным генам рекомбинационной репарации у всех эукариот. У дрозофилы его мутации еще не описаны.

На материале геномной ДНК мутанта rad201, его ревертантов, а также контрольной линии Oregon R с помощью метода полимеразной цепной реакции (ПЦР) был исследован район генома дрозофилы, охватывающий оба гена, а также их фланговые последовательности ДНК в 5'-направлении (по 1.5 kb выше старт-кодона каждого гена). Использовали полимеразу TAQ и большую группу синтезированных встречных праймеров, разбивающих район на достаточно короткие промежутки. По результатам анализа установлено, что геномная ДНК контрольной линии и ревертантов в исследованном районе не имеет различий, тогда как у мутанта она содержит вставку (более 5kb) в 5'- промоторной зоне гена Rad51C, на расстоянии 400-420 нуклеотидов выше старт-кодона. Предполагается, что она является инсерцией мобильного генетического элемента, нарушающего экспрессию гена Rad51C.

 

Полторадня Ю.А.

Санкт-Петербургский Государственный Технологический Институт,

Санкт-Петербург Санкт-Петербургский институт ядерной физики им. П. Константинова, Гатчина