Вы здесь

Главная

Очистка и спектральный анализ реакционных центров мутантов Rhodobacter sphaeroides

ID_Статьи: 
18.00

В состав РЦ входят три полипептида L, М и Н и кофакторы переноса элект­рона: 4 молекулы бактериохлорофилла, 2 молекулы бактериофеофитина, 2 моле­кулы хинона и атом негемового железа. Первичным донором электрона является димер бактериохлорофилла (спецпара, Р), атомы магния которого лиганди-руются остатками гистидина. Далее в цепи переноса располагается молекула мономерного бактериохлорофилла (В), атомы магния которого также лиганди-руются гистидиновыми остатками, и молекула бактериофеофитина (Н). В конце цепи расположена молекула хинона(Q) - конечного акцептора е. Кофакторы переноса е образуют две симметричные ветви, однако перенос е осуществляет­ся только по одной, так называемой А цепи. Расположение аминокислот в поли­пептидах и их суммарный заряд способствует переносу з от Р к QA Внесение аминокислотных замещений в окружении молекулы спецпары (Р) и молекулы Бд позволяет ответить на вопрос о роли отдельных аминокислот в процессе переноса е. К настоящему моменту методом сайт-направленного мутагенеза получены 11 мутантов, несущих аминокислотные замены в L и М белковых субъединицах РЦ. Наличие мутаций подтверждено определением нуклеотид-ной последовательности ДНК после мутагенеза и рестриктным анализом. К настоящему моменту разработан экспресс-метод очистки РЦ и выделены РЦ мутанта, у которого вблизи ВА (положение L 128) тирозин заменен на фенилала-нин. Показано, что замещение полярной аминокислоты на неполярную приво­дит к увеличению времени жизни состояния P+QA - . РЦ, у которых в позиции L154 лейцин заменен на тирозин и гистидик являются нестабильными и ведет­ся поиск метода для их выделения.

 

Болгарина Т.И., Хатыпов Р.А., Васильева Л.Г., Шкуропатов А.Я.

Институт фундаментальных проблем биологии РАН, Пущино