Вы здесь

Главная

Очистка и некоторые каталитические свойства НАДФ-зависимой малатдегидрогеназы из сердца крысы в норме и при экспериментальной ишемии

ID_Статьи: 
48.00

Известно, что универсальным неспецифическим звеном развития многих сердечно-сосудистых патологий является интенсификация образования активных форм кислорода. НАДФ-зависимая малатдегидрогеназа (НАДФ-МДГ) (КФ 1.1.1.82) может принимать участие в контроле свободно-радикальных процессов за счет использования НАДФН, образующегося в данной реакции, в ходе функци-онирования глутатионредуктазной / глутатионпероксидазной антиоксидантной системы. Целями данной работы являлись очистка и исследование некоторых каталитических свойств НАДФ-МДГ из кардиомиоцитов крысы в норме и в условиях ишемии. Ишемию миокарда моделировали путем перевязки нисходящей левой коронарной артерии. Активность фермента определяли спектрофотометрически при 340 нм. Значения удельной активности НАДФ-МДГ из гомогената сердца крысы составляли 0.15±0.01 и 0.22±0.014 ФЕ/мг белка в норме и при ишемии соответственно. Процедура выделения и очистки фермента включала следующие стадии: гомогенизацию, фракционирование (NH4)2S04 в границах насыщения 30-70 %, гель-фильтрацию на сефадексе G-25 и ионообменную хроматографию на ДЭАЭ-целлюлозе. В результате были получены очищенные в 27,5 и 23,4 раза ферментные препараты НАДФ-МДГ из кардиомиоцитов крысы в норме и при ишемии соответственно. Фермент проявлял положительную ко оперативно сть к субстрату оксалоацетату как в норме, так и при ишемии. Значения коэффициента Хилла для НАДФ-МДГ по оксалоацетату составляли 1.83±0.07 в норме и 1.50±0.10 в условиях океидативного стресса, вызванного ишемией. Значения Кт для НАДФ-МДГ по НАДФН в норме и в условиях экспериментальной ишемии составляли 0.04±0.003 и 0.06±0.004 мМ соответственно. Наблюдаемые изменения в каталитических свойствах фермента, по-видимому, могут играть роль в регуляции его активности в условиях интенсификации свободно-радикальных процессов.

 

Сафонова O.A., Матасова Л.В.

Воронежский государственный университет, Воронеж (Россия)