Вы здесь

Главная

Новый подход к колориметрическому выявлению анализируемой ДНК и точечных мутаций в её последовательности

ID_Статьи: 
84.00

Разработан новый подход к достоверному выявлению анализируемого амплификата ДНК. Подход основан.на лигировании тандема трех коротких олигонуклеотидов, один из которых несет остаток биотина. Колориметрическую визуализацию гибридизационного комплекса ДНК/продукт лыгирования, после УФ-иммобилизации его на капроне, проводили с помощью конъюгата стрептавидин-щелочная фосфатаза.

На примере использования ПЦР-фрагментов генома вируса иммунодефицита человека (ВИЧ-I) показано, что разработанный подход позволяет не только выявлять анализируемую ДНК, но и определять наличие в её последовательности точечных мутаций. Перебором 12-ти тетрамеров (центральный компонент тандема) можно однозначно установить какая именно мутация и в какой позиции.

На примере ПЦР-фрагментов человеческого гена CFTR, тринуклеотидная делеция delF508 в котором является причиной одной из самой распространенной наследственной патологии человека-муковисцедоза, показано, что специфичность выявления продукта лигирования зависит от нуклеотидного состава биотинилированного компонента тандема. Установлено, что в качестве анализируемой ДНК могут использоваться ПЦР-фрагменты различной длины, но превышающие -100 п.о. Показано, что разработанный подход позволяет достоверно различить наличие в ДНК-фрагментах как делении, так и инсерции.

Подход является перспективным в плане создания тест-систем для медицинской ДНК-диагностики наследственных патологий человека, раннего тестирования генетических маркеров в селекции животных и растений, для идентификации штаммов микроорганизмов, исследований в области популяционной генетики.

 

Кабилов M.Р.

Новосибирский институт биоорганической химии, Новосибирск (Россия)