Вы здесь

Главная

Новый метод определения вируса Аужески

ID_Статьи: 
108.00

Вирус псевдобешенства (Pseudorabies virus (PRV)), относящийся к AIphaherpesvirinae и гомологичный простому вирусу герпеса типа 1 (HSV-1), является экономически важным патогеном, вызывающим болезнь Аужески у большинства млекопитающих, исключая высших приматов и человека. Разработка высокочувствительных методов детекции вируса имеет важное значение для диагностики заболевания на ранних стадиях у ценных сельскохозяйственных пород скота.

Целью данной работы была разработка высокочувствительного твердофазного биолюминесцентного иммуноферментного анализа гликопротеина В (gB) из оболочки PRV.

Для создания метода использовали пару моноклональных антител-к разным эпитопам этого антигена и биолюминесцентный фотобелок- обелин, из гидроидного полипа Obelia longissimz- в качестве репортера. Его присоединяли к антителу посредством высокоаффинной пары барназа-барстар с использованием методов химической модификации и рекомбинантной ДНК-технологии. При объединении антитела с фотобелком, в качестве репортера, посредством белковой пары барназа-барстар, не происходило значительной потери его активности, как в случае прямого химического конъюгирования.

Моноклональные антитела против gB из PRV. конъюгированные с обелином посредством барназы-барстара, позволили выявить антиген в концентрации 5пг/мл. Таким образом чувствительность разработанной биолюминесцентной системы была в 40 раз выше аналогичной фотометрической системы.

 

Синегина Л.Л.1, Руденко Н.В.1, Аржанов М.А.1, Ксензенко В.И.2, Ивашина Т.В.3, Моренков О.С.4, Винокуров Л.М.1

1Филиал Института биоорганической химии им, М.М.Шемякина и Ю. А Овчинникова РАН, г.Пущино

2 Институт исследований бежа РАН, г. Пущино

3Институт биохимии и физиологии микроорганизмов РАН, г.Пущино

4Институт биофизики клетки РАН,г.Пущино