Вы здесь

Главная

Новый метод измерения активности нейраминидазы вируса гриппа

ID_Статьи: 
26.00

Определение нейраминидазной активности необходимо не только для исследования и харктеристики различных штаммов вируса гриппа, но и как удобный метод диагностики заболевания.

Целью данной работы являлась разработка удобного метода измерения активности нейраминидазы вируса гриппа. Прицип предлагаемого метода заключается в разделении субстрата и продукта реакции за счет различия их зарядов. В качестве субстрата использовалась сиалиллактоза (3'-SiaLac), меченая флуоресцентной меткой (BODIPY). После отщепления остатка Sia происходит изменение заряда субстрата. Преимуществами данной метки являются: устойчивочть, узкий максимум флуоресценции и компактность. Разделение субстрата и продукта проводилась с помощью ионообменной хроматографии (DEAE-Sepharose) в двух вариантах: микроколоночном и декантационном.

Проведены измерения флуоресценции З'-SiaLac-BODIPY в диапазоне рН от 5 до 9, наибольшая интенсивность флуоресценции наблюдалась при нейтральных значенях рН.

Для штамма вируса гриппа A/H3N2/1180 иследовано влияние рН и времени инкубации на выход продукта реакции десиалирования. Установлено, что оптимальной является инкубация в течение 8 -10 часов при температуре 37°С. Изменение рН реакционной среды с 5 до 7,2 существенно не влияет на степень прохождения реакции.

Таким образом, разработан новый метод изучения активности нейраминидазы вируса гриппа, основанный на использовании в качестве субстрата флуоресцентно меченного трисахарида З'-SiaLac-BODIPY. Метод позволяет измерять активность фермента в неразрушенном вирусе.

 

 

Бовин Н.В.1, Мочалова Л.В.1, Штыря Ю.А.2

1 Институт биоорганической химии им М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН, Москва

2 Московский государственный университет им М.В. Ломоносова, Москва