Вы здесь

Главная

Некоторые аспекты конструирования праймеров к ДНК молочнокислых бактерий

ID_Статьи: 
89.00

Анализ работ по систематике молочнокислых бактерий (МКБ), появившихся в последние годы, свидетельствует о том, что отсутствие четких дифференциру­ющих признаков на основании изучения морфолого-культуральных и физиоло-го-биохимических свойств отдельных видов МКБ затрудняет их идентифика­цию, поэтому в таксономии этих микроорганизмов все шире используются ге­нетические методы, включающие обнаружение различий в генах рРНК и в спейсерных участках.

Цель наших исследований - разработать праймеры для амплификации уча­стков гена 16S рРНК, которые позволяют идентифицировать некоторые штам­мы МКБ на видовом или внутривидовом уровне. Ген 16S рРНК L. plant arum использовался в качестве модельной системы для изучения особенностей и оценки возможности применения праймеров к гену 16S рРНК для дифференци­ации и других видов МКБ.

Разработаны праймеры LP1 и LP2 к гену 16S рРНК, которые позволяют про­вести дифференциацию молочнокислых бактерий: L. plantarum, L. agilis, L. delbrueckii subsp. bulgaricus и 5. salivarius subsp. thermophilus. При разной тем­пературе отжига возможна штаммоспецифическая и видоспецифическая диффе­ренциация. Фрагмент, имеющий молекулярную массу 864 н. п., считываемый в гене 16S рРНК L. plantarum, позволил провести видоспецифическую дифферен­циацию L. plantarum и L. agilis при температуре отжига 48°С. Также проведена штаммоспецифическая дифференциация L. plantarum, L. delbrueckii subsp. bulgaricus УKM B-2700, 5. salivarius subsp. thermophilus УКМ B-2539 на уровне ДНК благодаря наличию дополнительных фрагментов, которые синтезировались за пределами гена 16S рРНК. Анализ возможных зон связывания праймеров LP1 и LP2 показал важность отдельных отличий для обеспечения специфичнос­ти реакции по З'-концу длиной в 10 н.

 

Лащевский В.В., Коваленко Н.К.

Институт микробиологии и вирусологии, Киев (Украина)