Вы здесь

Главная

Некоторые аспекты каталитического действия цитоплазматической аконитагидратазы из гепатоцитов крыс

ID_Статьи: 
7.00

Предполагается, что существенное значение для снижения уровня активных форм кислорода имеет уровень цитрата, от содержания которого зависит интен­сивность образования гидроксильного радикала в реакции Фентона, субстрата­ми которой являются пероксид водорода и Fe2+. Цитрат обладает хелатирующи-ми свойствами по отношению к Fe2+. В связи с этим, существенный интерес представляет исследование функционирования аконитатгидратазы, катализиру­ющей превращение цитрата в изоцитрат через цис-аконитат. Очистка фермен­та включала гомогенизацию, фракционирование сульфатом аммония (40-65% насыщения), гель-фильтрацию на сефадексе G-25 и ионообменную хроматогра­фию на ДЭАЭ-целлюлозе. С помощью 39-кратной очистки из гепатоцитов крыс получен ферментный препарат аконитатгидратазы с удельной активностью 4,8 ед. на мг белка. Показано, что зависимость скорости ферментативной реакции от концентраций цитрата и изоцитрата подчиняется кинетике Михаэлиса-Мен-тен. Км для аконитатгидратазы по цитрату и изоцитрату, определенные мето­дом Лайнуивера-Берка, составили 0,87 мМ и 0,52 мМ соответственно, Ионы Fe2+ обладают выраженным активирующим действием: максимальный прирост активности наблюдается при концентрациях ионов Fe2+ до 2 мМ, при бо­лее высоких концентрациях наблюдается выход на плато. Ионы Са2+ в концен­трациях выше 0,05 мМ оказывают ингибирующее действие. Ионы Мn2+ и Mg2+ в концентрациях до 0,4 мМ и 1 мМ соответственно оказывают активирующее воздействие, при более высоких концентрациях наблюдается ингибирование ак­тивности аконитатгидратазы. Ингибирующий эффект на активность аконитат­гидратазы оказывает Н2О2 при концентрациях выше 0,08 мМ. Таким образом, предполагается, что активация аконитатгидраты ионами металлов переходной валентности может приводить к повышению уровня цитрата, и, следовательно, снижать интенсивность протекания реакции Фентона.

 

Андреешева E.M., Матасова Л.В., Иванникова Р.В., Али М.М.

Воронежский государственный университет, Воронеж