Вы здесь

Главная

Нечувствительная к действию тапсйгаргина и подавляемая рутениевым красным и азидом натрия аккумуляция Са2+ в гладкомышечных клетках

ID_Статьи: 
25.00

Чувствительная к действию рутениевого красного и азида натрия Mg2+, АТР-зависимая аккумуляция Са2+ в гладкомышечных клетках изучалась на сус­пензии миоцитов миометрия крыс, обработанных раствором дигитонина (0,1 мг/мл). С применением радиоизотопного метода (45Са2+) была исследована кинетика Мg2+,АТР-зависимого накопления Са2+ из стандартной среды инкуба­ции, содержащей (мМ): 25 Hepes, 125 КС1, 25 NaCl, 3 ATP, 3 сукцинат натрия, 3 MgCl2, 2 Рi, 0,01 (40CaCl2+45CaCi2), а также 100 нМ тапсигаргина, в миоцитах. На 4-5-ой минутах наблюдался стационарный уровень аккумуляции Са2+ - 1460±54 пмоль Са2+/ 10е миоцитов. Начальная скорость аккумуляции Са2+ V0 равнялась 1260±130 пмоль Са2+/106 миоцитов за 1 мин. Система транспорта Са2+ была абсолютно зависима от присуствия Mg2+ и АТР. Повышение концентрации фос­фата калия от 0,1 до 10 мМ приводило к активации аккумуляции Са2+. При отеуствии фосфата в среде инкубации накопление Са2+ составляет 83-85% от контрольного значения. Величина константы активации Ка по фосфату -0,40±0,06 мМ. Рутениевый красный и азид натрия подавляли аккумуляцию Са2+. Значение кажущейся константы ингибирования - 0,6±0,2 мкМ и 0,9±0,3 мМ соответственно. Значение концентрации катиона, при которой наблюдается максимальное накопление Са2+, 5*10-6 М, величины КСа2+ и Vmax по Са2+ - 1,0 мкМ й 2745±130 пмоль Са2+/106 миоцитов за 2 мин соответственно. Система Мg2+,АТР-зависимой аккумуляции Са2+ в митохондриях чувствительна к изме­нению рН среды инкубации и не зависит от смены концентрации ионов Na (в изотоническом режиме).

Таким образом, использование суспензии изолированных миоцитов, обрабо­танных раствором дигитонина, позволяет успешно изучать нечувствительную к действию тапсигаргина Mg2+,ATP-зависимую аккумуляцию Са2+ в митохонд­риях гладкомышечных клеток.

 

Веклич Т.А.

Институт биохимии им. О.В. Палладина НАН Украины, Киев (Украина)