Вы здесь

Главная

Мотив 482КРККК требует участия дополнительных последовательностей для обеспечения ядерной локализации эукариотической тирозил-тТРК синтетазы

ID_Статьи: 
75.00

Аминоацил-тРНК синтетазы (aaRS) осуществляют высокоспецифичную ре­акцию присоединения L-аминокислот к соответствующим тРНК. Ранее мето­дом иммуноэлектронной микроскопии показано относительно высокое содер­жание в ядре тирозил-тРНК синтетазы (TyrRS) и некаталитического компо­нента мультисинтетазного комплекса белка р43 (предшественника цитокина ЕМАРII), С-концевые модули которых гомологичны (52,7 % идентичности). Так­же показано существование системы экспорта тРНК из ядра клеток эукариот в цитоплазму в виде аминоацил-тРНК, что подтверждает присутствие aaRS в ядре. Анализ аминокислотной последовательности TyrRS-с помощью програм­мы PSORT II обнаружил возможный мотив ядерной локализации 482РККК в последовательности С-модуля. С целью проверки участия данного мотива, во внутриклеточной локализации изолированного С-модуля TyrRS с использовани­ем метода QuickChange был проведен сайт-направленный мутагенез K484N в последовательности С-модуля, клонированной в векторе рК18. Фрагменты ДНК, кодирующие С-модуль (дикий тип и с введенной мутацией) были субклонирова-ны в вектор pEGFP-Cl, обеспечивающий экспрессию гибридного белка GFP (зеленый флуоресцирующий белок)-С-модуль в клетках млекопитающих (HUVEC) под контролем цитомегаловирусного промотора. Предварительные эксперименты с использованием флуоресцентной микроскопии показали несу­щественную разницу во внутриклеточном распределении обеих форм гибрид­ного белка (оба присутствовали только в цитоплазме). На основании получен­ных данных можно сделать вывод, что мотив 482КРККК требует участия допол­нительных последовательностей локализованных в N-концевой части фермен­та, для обеспечения ядерной локализации TyrRS.

 

Корепкая Е.А., Леванец О.В., Дубровский А.Л., Корнелюк А.И.

Институт молекулярной биологии и генетики НАН Украины, Киев, Украина