Вы здесь

Главная

Метод идентификации человека на основе ПЦР анализа

ID_Статьи: 
18.00

Имея в руках метод тестирования разнообразных последовательностей нуклеиновых кислот человечество приобрело возможность изучать и даже воздействовать на многие процессы, обеспечивающие жизнедеятельность любой клетки. Настоящий прорыв в исследованиях молекулярной биологии был осуществлен созданием метода ПЦР (полимеразная цепная реакция). В геноме человека существуют многочисленные повторы коротких последовательностей ДНК в зависимости от их размеров подразделяющие на минисателлиты VNTR (от 10 и более нуклеотидов) и микросателлиты STR (как правило, 4 нуклеотида). Поскольку последовательности являются полиморфными и относительно стабильными в течение всей человеческой жизни, они являются молекулярным банком информации для медицинской диагностики и криминалистической идентификации. Классические этапы выделения ДНК через фенол-хлороформную очистку и спиртовое осаждение не позволяют воспроизводимо получать образец ДНК из объектов с чрезвычайно низким содержанием. В связи с этим мы использовали метод выделения ДНК, основанный на сорбции магнитными сорбентами. Выделение ДНК: образец биологического материала подвергали воздействию 4М гунидинтиоционата. Лизировали от 30 до 60 минут. Лизис костной ткани и фрагментов волоса наступает через 5-6 часов кипячения в растворе на основе гуанидинтиоционата. Далее к лизированным образцам добавляются магнитные сорбенты. Выделенная ДНК в минимальном количестве (1-50 нг) служит матрицей для ПЦР. Нами стандартизированы условия для амлификации фрагментов четырех локусов: D3S1358, D8S1179, Dl 8S51, THOI. При сравнительном типировании ДНК индивидуума по шести локусам вероятность случайного совпадения составляет 1 на 250 млн. человек, а типирование по восьми локусам снижает эту вероятностьдо 1 на 160 млрд. человек и может служить минимальным критерием генетического паспорта человека. Визуализация амлифицированных фрагментов ДНК проводили электрофоретическим методом в денатурирующем полиакриламидном геле.

 

Патрушев М.В.1, Ушакова Т.Е.2

1 Институт биофизики клетки РАН, Пущино (Россия)

2 Институт теоретической и экспериментальной биофизики РАН, Пущино (Россия)