Вы здесь

Главная

Мажорный белок циоплазматических мРНП р50 расщепляется протеасомой

ID_Статьи: 
162.00

Y-бокс белки являются важнейшими модуляторами различных клеточных процессов. В зародышевых клетках эти белки участвуют в запасании мРНК. В соматических клетках Y-бокс белки, такие как р50, являются мажорными компо­нентами цитоплазматических мРНП и регулируют трансляцию мРНК. Кроме того, они контролируют транскрипцию генов, участвующих в клеточной проли­ферации, апоптозе и иммунном ответе. Однако до,сих пор ничего не было изве­стно об их собственной регуляции. Одним из возможных механизмов может быть их специфическая деградация.

В представленной работе мы выделили из ретикулоцитах кролика и иденти­фицировали протеазу, специфично расщепляющую р50. Используя хроматогра-фические методы мы получили высокомолекулярный комплекс (Mr - 700 кДа) с протеазной активностью к р50, который состоит из нескольких субъединиц весом 20-35 кДа. Используя моноклональные антитела к двум субъединицам протеасомы (Mr 27 и 30-33 кДа) в выделенном нами, комплексе мы обнаружи­ли субъединицы с такой же подвижностью при PAGE. Мы показали, что пеп­тидный субстрат протеасомы, Suc-LLVY-AMC конкурентно ингибирует гидролиз белка р50. Lactacystyn, самый селективный ингибитор протеасомы, также ингибирует расщепление. Эти данные указывают на то, что полученный нами комплекс является протеасомой. Оказалось, что этот фермент проявляет высо­кую субстратную специфичность: белок р50 расщепляется на два мажорных фрагмента, в то же время, такие белки как альбумин, РАВР, казеин, тубулин оста­ются интактнымй. Мы определили, что расщепление идет между 219 и 220 остатками. Интересным оказался тот факт, что расщеплению подвержен только рекомбинантный р50, в отличии от р50, выделенного из ретикулоцитов кролика, который, вероятно, несет защитную модификацию. Масс-спектральный анализ показал, что белок, выделенный из ретикулоцитов, ацетилирован и фосфорилиро-ван. В данный момент ведутся работы по определению модификации, защищаю­щей белок от расщепления.

 

Сорокин А.В., Скабкин М.А., Гурьянов С.П., Овчинников Л.П.

Институт белка РАН Пущино