Вы здесь

Главная

Масс-спектрометрическое определение энзиматических свойств протеолитических ферментов на примере аспартатной протеиназы из Trichoderma viride

ID_Статьи: 
52.00

Протеолитические ферменты (протеиназы) широко представлены в природе и к настоящему времени выявлено несколько тысяч их представителей. Эти ферменты играют важную роль в регуляции основных физиологических процессов, как в норме, так и при патологии. Кроме того, они используются в качестве катализаторов в технологических процессах, а также в структурных исследованиях белков. Наиболее важными свойством этого класса ферментов является их специфичность, которая, прежде всего, определяет их участие в реакциях ограниченного протеолиза, которые инициируют появление из предшественников новых биологически активных соединений.

Как правило, изучение специфичности протеиназ осуществляется при гидролизе достаточно коротких пептидов или даже соответствующих эфиров аминокислот. Выбор субстратов проводится таким образом, чтобы в них разрывалось ограниченное количество связей, поскольку идентификация образующихся продуктов вызывает затруднения. При использовании более сложных субстратов, в которых осуществляется гидролиз нескольких пептидных связей, специфичность изучались только для продуктов исчерпывающего гидролиза.

В настоящей работе подобные исследования, включая использование в качестве субстратов не только пептидов, но и белков, были продолжены работе на примере изучения специфичности карбоксильной протеиназы из Trichoderma viride (Тu-протеиназы). С помощью масс-спектрометрических методов были определены специфические сайты разрывов не только в пептидных, но и белковых субстратах. Были определены кинетические параметры для отдельных, наиболее быстро гидролизуемых связей.

 

Новиков А.В.1, Савельева Н.В.2, Симанкова А.Н.2, Миргородская О.А.2

1Институт аналитического приборостроения РАН, Санкт-Петербург (Россия)

2Институт цитологии РАН, Санкт-Петербург (Россия)