Вы здесь

Главная

Кристаллизация и предварительные структурные исследования бактериальных регуляторов экспрессии генов - белков Hfq из Escherichia coli и Pseudomonas aeruginosa

ID_Статьи: 
24.00

Hfq - высококонсервативный термостабильный бактериальный белок. Он регулирует экспрессию большого числа бактериальных генов, включая гены ре­парации ДНК. Hfq действует при разных видах стресса и стимулирует экспрес­сию факторов вирулентности у некоторых патогенных видов бактерий. Белок взаимодействует с различными клеточными регуляторными РНК и меняет их активность. Нами показано, что в растворе в свободном от РНК состоянии Hfq существует в виде гексамера. Недавно было обнаружено, что Hfq относится к классу бактериальных Sm-подобных белков, регулирующих РНК-РНК взаимодей­ствия, и имеет гомологи среди архей и эукариот, которые так же существуют в виде мультисубъединичных комплексов. Пространственные структуры челове­ческого и архейного Sm-комплексов решены.

Мы клонировали и суперэкспрессировали гены hfq бактерий Escherichia coli и Pseudomonas aeruginosa и получили чистые Hfq белки в препаративных количествах. Кристаллы белка Hfq Е. coli (EcoHfq) достигали размеров 200x120x120 мкм (пространственная группа Р41 параметры ячейки а = b = 130 Е, с = 172 Е), кристаллы белка Hfq P. aeruginosa (PaeHfq) достигали размеров 1200x500x20 мкм. Оба типа кристаллов являются пригодными для рентгенострук-турного анализа и отражают рентгеновские лучи с разрешением до 2,4 Е. Для получения тяжелоатомных производных и решения проблемы фаз нами были получены и закристаллизованы белки EcoHfq и PaeHfq, в которых метиониновые остатки заменены на селенометиониновые. Для съемки всех типов кристаллов в условиях замораживания подобраны соответствующие криорастворы.

Решение структур беков EcoHfq. и PaeHfq; поможет понять механизм дей­ствия регуляции экспрессии генов и стрессового ответа у бактерий, бактериаль­ной вирулентности и выживания и позволит нам сравнить некоторые аспекты эволюции РНК-связывающих регуляторов у Бактерий, Эукариот и Архей.

 

Васильева Ю.М., Габдулхаков А.Г.1, Блези У.2, Гарбер М.Б.1

1 Институт белка РАН, Пущино

2 Венский биоцентр, Вена (Австрия)