Вы здесь

Главная

Конструирование векторов для секретируемой экспрессии химерных Fab фрагментов тяжелой и легкой цепей антитела к ФНО-б человека в Е. coli в составе бицистрона с использованием лидерного пептида stll

ID_Статьи: 
66.00

Фактор некроза опухоли альфа (ФНО-б, TNF-б) -- медиатор воспаления, выделяющийся в кровь при бактериальных инфекциях (септический шок) и вызывающий некроз некоторых опухолей (сигнал на аутоотторжение), а также медиатор истощения при паразитарной инфекции. TNF-a проявляет множество биологических активностей, значительная часть которых аналогична активностям IL-1. При повышенном содержании TNF-б в крови могут возникать боли, а длительное нахождение TNF-a в кровотоке приводит к истощению мышечной и жировой ткани (кахексии) и супрессии кроветворения. Кроме того, показано влияние TNF-б на развитие таких патологических состояний, как ревматоидный артрит, болезнь Крона, воспалительные заболевания кишечника. В связи с этим получение антител к фактору некроза опухоли человека как диагностического и, возможно, лекарственного препарата в настоящее время является актуальным.

На основе вектора рТгс99А и полученных ранее в лаборатории химии генов ИБХ РАН из экспрессирущей библиотеки к ДНК генов вариабельных областей тяжелой и легкой цепей антитела к TNF-б человека, константных Сн1- и Ск-доменов IgG человека и кодирующих последовательностей лидерного пептида stll нами сконструированы экспрессионные плазмиды pTrc-stllHL и pTrc-stllLH, содержащие бицистроны тяжелых и легких цепей Fab фрагментов антитела под контролем промотора Ptrc с участком инициации трансляции лактозного оперона С помощью методов иммуноферментного анализа изучена конститутивная и индуцибельная экспрессия, а также клеточная локализация продуктов экспрессии бицистронов в штаммах Е. coli JM105, BL21(DE3), SG20050, Rosetta™. Опробован метод выделения полученных антител с помощью аффинной хроматографии.

 

Топорова В.А., Киселев А.В., Вржеш Е.П., Алиев Т.К., Панина А.А., Коробко В.Г.

Институт биоорганической химии им. М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН, Москва, Россия.