Вы здесь

Главная

Конструирование и характеристика маркированных штаммов-деструкторов нафталина

ID_Статьи: 
11.00

Целью данной работы являлось маркирование штаммов - деструкторов нафталина методом транспозонного мутагенеза для последующего их использования в модельных почвенных экспериментах. Плазмида биодеградации нафталина pNF142 была помечена мини-транспозоном TnМоd/-ОТс, содержащим ген, кодирующий резистентность к тетрациклину. Полученный маркированный вариант плазмиды pNF142::TnМоd-OTc, устойчивый к тетрациклину, путем конъюгации был перенесен в штамм Pseudomonas putida UT2442, содержащий в составе хромосомы репортерные гены флюоресценции gfp и резистентности к канамицину. В ходе реципрокного скрещивания штаммов наблюдался перенос меченого варианта плазмиды pNF142 из штамма P. putida UT2442 (pNF i 42: :TnMod-OTc) в ауксотрофный реципиент Р putida BS394 cys. Была исследована фенотипическая стабильность плазмид деградации нафталина: pNF142, pNF142::TnМоd-OTe, pBS216. Показано, что данные плазмиды стабильно поддерживаются в штаммах Pseudomonas fluorescens 142NF, P. putida BS394 cys и UT2442. Вставка плазпозона TnMod-OTc в плазмиду pNF142 не влияет на стабильность плазмиды и экспрессию плазмидных генов биодеградации нафталина. Сконструированные путём коньюгационного переноса штаммы Р putida UT2442 (pNF142) и BS394 (pNF142::TnМоd-OTc) cys обладают ростовыми параметрами, близкими к удельной скорости роста природного изоляга-штамма Р fluorescens 142NF (pNF142), а трансконьюгантный штамм P. putida UT2442 (pNF142::TnMod-OTc) демонстрирует большую по сравнению с природными штаммами удельную скорость роста. Полученные маркированные штаммы-деструкторы могут быть использованы для мониторинга горизонтального переноса плазмид между итродунированными и аборигенными микроорганизмами, а также для изучения процессов биодеградации в различных модельных системах.

 

Ахметов Л.И.2, Измалкова Т.Ю.1, Соколов С.Л.1, Есикова Т.З.1, Пунтус И.Ф.1, Кошелева И.А.1,2, Филонов А.Е.2

1Институт биохимии и физиологии микроорганизмов, Пущино (Россия).

2Пущинский государственный университет, Пущино (Россия)