Вы здесь

Главная

Комбинаторный биосинтез новых соединений с использованием генов оксигеназ, контролирующих продукцию ангуциклических поликетидов

ID_Статьи: 
92.00

Ангуциклины - новая группа поликетидов, проявляющие ценные биологические активности, в том числе противоопухолевую. Характером их окисления во многом определяет тип биологического действия. В связи с растущей потребностью в новых антибиотиках, значительный интерес представляет генетический "дизайн" новых поликетидов. С этой целью мы использовали ряд генов, задействованных в окислении ангуциклинов. Их гетерологическая экспрессия позволит: а) получить новые вещества-как результат модификации чужеродной оксигеназой соединений, продуцируемых хозяином б) оценить степень субстратной специфичности оксигеназ.

Сконструировано плазмиды для экспрессии 6 генов оксигеназ. Это гены: urdM (кластер генов биосинтеза урдамицина A; UrA), lanM и IndM (контролируют гидроксилирование 3-го кольца ландомицина Е и A; LaE и LaA), lndZ5 (гидроксилирование 1-го кольца LaE), ovdB и ovdOIII (биосинтез овъедомицина). Эти плазмиды были перенесены с помощью конъюгации E.coli - Streptomyces в продуценты ангуциклических антибиотиков: UrA (Streptomyces fradiaeTu2717), LaE {S.globisporus 1912), LaA (S.cyanogenus SI36). В частности, продуценты LaA и LaE использовали для экспрессии urdM, ovdovdOIII, продуцент UrA - для экспрессии lanM, IndM и lndZ5. С помощью Саузерн-гибридизации, физического выделения плазмидной ДНК и ее рестрикционного картирования было доказано, что сконструированные штаммы несут соответствующие плазмиды. Тонкослойная хроматография метаболитов рекомбинантных штаммов показала, что S.fradiae (IndM), S.globisporus \ S.cyanogenus (urdM) продуцируют новые соединения. Полученные данные говорят о том, что оксигеназы LndM и UrdM могут воспринимать неестественные субстраты. Таким образом, гены IndM, urdM могут использоваться для комбинаторного синтеза новых биологически активных соединений.

 

Юськевич В.Ю., Грэк М.Р., Ребец Ю., Осташ Б.Е., Федоренко В.А.

Львовский национальный университет имени И.Франко, Львов, Украина