Вы здесь

Главная

Количественная детекция цитохимического маркера клеточного старения бета-галактозидазы

ID_Статьи: 
103.00

Повышенная активность цитохимически детектируемого фермента бета-галактоз ид азы (b-gal) при рН 6.0 является универсальным маркером клеточного старения в культурах клеток и тканях организма. При использовании бета-галактозидазы в качестве маркера старения основным подходом является визуальный подсчет числа b-gal - позитивных клеток без учета степени окрашивания таких клеток, коррелирующей с количеством содержащегося фермента. Такой подход не позволяет учитывать фракцию клеток, которая проявляет бета-галактозидазную активность относительно небольшой интенсивности. Разработка количественного определения активности бета-галактозидазы в каждой клетке позволит получить значительно более полную и точную информацию о распределении данного маркера в изучаемой популяции клеток. В работе использовали культуру эмбриональных фибробластов мыши. Детекцию бета-галактозидазы производили с помощью субстратного красителя X-gal. Изображения клеток анализировали на компьютере. Интенсивность окраски клеток измеряли с помощью разработанной нами компьютерной программы, учитывающей повышение доли синего и зеленого света в RGB системе, измеряющей интенсивность в красной, синей и зеленой области спектра. Показано, что при обсчете данных по разработанной программе во всех клетках, включая те, в которых при визуальной оценке не обнаруживается окраска, показатели синего и зеленого спектров повышены, что может свидетельствовать о том, что фермент бета-галактозидаза в небольшом количестве присутствует в каждой клетке. Это соответствует предположению о лизосомной локализации активности фермента при рН 6.0. Данная система детекции бета-галактозидазы позволяет осуществлять количественную оценку активности бета-галактозидазы в отдельных клетках и объективно ранжировать клетки по интенсивности окраски. Предложенная методика может быть использовано в области биологии и генетики соматических клеток, клеточного старения, раковой трансформации и медицинской диагностики.

 

Шейко Я.И.

Институт генетики и цитологии, Минск (Беларусь)