Вы здесь

Главная

Коинтеграция вектора PJFF350 с плазмидой Р85 Azospirillum brasilense SP245

ID_Статьи: 
19.00

Модельный штамм ассоциативных бактерий Azospirillum brasilense Sp245 содержит плазмиды с молекулярными массами 85 (р85), 120 (р120) и более 300 МДа.

Бактерии вида A.brasilense имеют смешанный тип жгутикования: консти­тутивно продуцируемый полярный жгутик (Fla), отвечающий за плавание (Mot), и продуцируемые на плотных и полужидких средах многочисленные латераль­ные жгутики (Laf), отвечающие за роение (Swa).

Ранее нами была паказана высокая частота коинтеграции суицидальных век­торов с р85. В данной работе были использованы мутанты, полученные при коинтеграции вектора для омегонового мутагенеза pJFF350 с р85: Fla-Laf-SK051, Mot-Swa- SK248, и Swa++ ВК570. Гибридизация, клонирование и последующий рестрикционный анализ показали, что у SK051 и SK248 коинтеграция произошла с одним и тем же XhoI-фрагментом р85, размером около 23 тпн, но с образова­нием разных продуктов слияния. При построении физической карты клониро­ванных фрагментов с обеих сторон от места встраивания были обнаружены обращенные последовательности длиной около 1 тпн. Возможно в составе р85 находится мобильный элемент, в состав которого входят локусы fla/laf/mot. Анализ ВК570 показал, что встраивание произошло в другой Хhol-фрагмент р85, размером около 20 тпн.

Таким образом показано, что строгой сайт-специфичности при коинтеграции суицидального вектора pJFF350 с плазмидой р85 нет, и фенотип мутантов зави­сит от положения вставки и от продуктов слияния. В геноме A. brasilense Sp245 выявлены два EсоRI-фрагмента, гомологичные локусам fla/laf/mot из р85.

 

Борисов И.В., Кацы Е.И.

Институт биохимии и физиологии растений и микроорганизмов РАН, Саратов