Вы здесь

Главная

Коэкспрессия гена шаперона skp улушает растворимость рекомбинантного анти-НЕR-2/NEU-мини-антитела, слитого с барстаром

ID_Статьи: 
190.00

В ходе разработки противораковых молекул на основе моноклональных ан­тител к специфическим опухолевым маркерам одним из серьезных препят­ствий является проблема растворимости и правильного фолдинга этих рекомби-нантных белков при экспрессии их генов в Е. coli. Одноцепочечные антитела, как правило, образуют нерастворимые агрегаты при экспрессии их генов в цитоплазме клеток Е. coli, что требует дополнительных стадий денатурации и ренатурации при их выделении. Перевод таких рекомбинантных белков в пе-риплазматическое пространство улучшает их растворимость, способствует пра­вильному сворачиванию, но в то же время значительно уменьшает их выход. Недавно было показано, что выход растворимых рекомбинантных антител мо­жет быть увеличен путем коэкспрессии гена skp Е. coli, кодирующего периплаз-матический белок Skp. В периплазме грам-отрицательных бактерий белок Skp функционирует, по-видимому, как молекулярный шаперон, необходимый для био­генеза белков внешней мембраны. Эти белки, выходя из цитоплазмы, проходят через плазматическую мембрану в ненативной конформации и при входе в периплазму должны быть немедленно защищены от деградации, агрегации и неправильного фолдинга периплазматическими шаперонами. Здесь и реализу­ется функция белка Skp.

В нашей лаборатории был получен ряд генно-инженерных конструкций, на­правляющих биосинтез химерного белка, в состав которого входит гуманизиро­ванное мини-антитело к онкобелку ЕrbВ2 и белок барстар (ингибитор бактери­альной рибонуклеазы барназы). Полученное рекомбинантное мини-антитело, анти-НЕR-2/neu-барстар, плохо растворимо, и даже при получении его в перип-лазматическом пространстве дает невысокий выход и далеко не оптимальное соотношение белка в растворимой и нерастворимой фракциях. С целью увели­чения доли растворимого белка мы сконструировали плазмиду на основе векто­ра pJB33, несущего ген Skp. Сравнение уровня экспрессии гена целевого белка, направляемого векторными плазмидами с геном Skp и без него, а также соотно­шение целевого белка в растворимой и нерастворимой фракциях показало, что при коэкспрессии гена Skp увеличивается выход рекомбинантного белка, глав­ным образом его растворимой фракции.

 

Юдина Г.Ф., Рыжаков Г.Н., Деев С.М.

Институт биоорганической химии им. М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН, Москва