Вы здесь

Главная

Кодируемые бактериофагами ДНМФ-киназы: идентификация новых ферментов, клонирование генов и исследование свойств

ID_Статьи: 
101.00

Дезоксирибонуклеозидмонофосфаткиназы (дНМФ-киназы) обеспечивают ключевую стадию фосфррилирования в синтезе трифосфатов de novo. Эти ферменты участвуют в фармакологической активации лекарственных средств нового поколения на основе модифицированных аналогов природных нуклеоти-дов. дНМФ-киназы бактериофагов отличаются широкой специфичностью, по­этому их исследование наиболее актуально. Настоящее исследование направ­лено на поиск новых дНМФ-киназ, кодируемых бактериофагами, и структурно-функциональное и эволюционное изучение уже известных.

Ген дНМФ-киназы бактериофага Т5, ранее очищенной нами до гомогенного состояния и охарактеризованной, впервые был идентифицирован, клонирован и экспрессирован в различных условиях. Достигнутая степень экспрессии соста­вила не менее 15% активного фермента по отношению к тотальному белку. Ферментативные свойства рекомбинантного белка не отличаются от таковых нативного фермента.

Гек 52 бактериофага JC31 был клонирован и экспрессирован. Было показано, что этот ген действительно кодирует дНМФ-киназу. Новый фермент проявлял активность на всех четырех канонических дезоксирибонуклеозидмонофосфатах.

Ген 1 бактериофага Т4, кодирующий дНМФ-киназу, был клонирован и эксп­рессирован в различных условиях. Посредством структурного наложения было показано сходство потенциальных структур, участвующих в образовании сай­тов связывания нуклеотидов у всех трех фаговых дНМФ-киназ.

В процессе определения первичной структуры гена dnk бактериофага Т5 был впервые секвенирован фрагмент ДНК кластера С ранней области генома бактериофага длиной 6,5 т.п.н. (5% генома).

 

Микулинская Г.В., Зимин А.А.2, Феофанов С.А.1, Мирошников А.И.1

1 Филиал института биоорганической химии РАН, Пущино

2 Институт биохимии и физиологии микроорганизмов РАН, Пущино