Вы здесь

Главная

Клонирование и экспрессия генов белков внешней мембраны ряда условно-патогенных микроорганизмов

ID_Статьи: 
18.00

Одним из возбудителей гнойно-воспалительных заболеваний является Pseudomonas aeruginosa. Практически все штаммы P. aeruginosa высоко резистентны к большинству из применяемых в настоящее время антибиотиков. Это обстоятельство обуславливает актуальность разработок препаратов для иммунопрофилактики и иммунотерапии против P. aeruginosa.

Поскольку в развитии иммунного ответа против бактериальных инфекций большая роль принадлежит наружным мембранным белкам, то целью настоящего исследования являлось изучение их свойств для создания вакцин.

На основании базы данных GenBank подобраны две пары праймеров для ПЦР-амплификации последова­тельностей генов белков внешней мембраны L и Н (oprL и оргН) P. aeruginosa. В качестве матрицы использовалась бактериальная ДНК (шт. РА103). Амплификаты встроены в плазмиду pQE-30 (QIAGEN). Полученными конструкциями трансформированы бактериальные клетки (Е. coli, штамм Ml5). В результате рестриктного анализа и секвенирования отобраны клоны, содержащие последовательности генов оргН и oprL.

При анализе в полиакриламидном геле по методу Лэммли продуктов экспрессии (которая проводилась в присутствии химического индуктора IPTG) выявлено наличие синтезируемых рекомбинантных белков, масса которых совпадала с расчетными данными. Однако, при проведении иммуноблота с помощью поликлональных антител против P. aeruginosa, специфичность была выявлена только в случае рекомбинантного белка oprL.

В дальнейшем полученную конструкцию предполагается использовать для создания белковой и ДНК вакцины против P. aeruginosa.

 

 

Никонова А.А.1, Злыгостев С.А.2, Калошин А.А.1

1НИИ вирусных препаратов им. Анджапаридзе РАМН, Москва (Россия)

2НИИ вакцин и сывороток им. Мечникова РАМН, Москва (Россия)