Вы здесь

Главная

Клонирование и бактериальная экспрессия Dbl-гомологичного домена слитого Bcr/Abl белка

ID_Статьи: 
30.00

В ходе цитогенетических исследований у 90-95% больных хроническим миелолейкозом (ХМЛ) и в 25-30% случаев острого лимфобластного лейкоза был выявлен специфический маркер - Ph-хромосома. Она образуется в ходе реципрокной транслокации t(9;22)(q34;ql 1), при которой-5-область гена Ьсг сли­вается с З'-участком протоонкогена c-abl. При этом образуется химерный ген bcr-abl, продукты экспрессии которого имеют повышенную- тирозинкиназную активность. Всг область белка Вск/Abl модулирует его тирозинкиназную ак­тивность и, таким образом, воздействует на онкогенный эффект. Эта область содержит Dbl-гомологичный домен- гуанйдйннуклеотидобменивающий фактор ГТФазы RhoA, регулятор динамики клеточного актина. Dbl домен представлен в р210 Всr/Аbl отсутствует в pl90Bcr/Abl. Экспрессия р210 наблюдается как при ХМЛ, так и При ОЛЛ, а р190 выявлен только у больных ОЛЛ. Следова­тельно, отсутствие Dbl домена является плохим прогностическим признаком, так же как дисфункция этого домена в р210 форме Всr/ Abl может быть причи­ной перехода ХМЛ в стадию бластного криза. В настоящее время диагностика Ph-позитивных лейкемий проводится, в основном, методом ОТ-ПЦР. Этот спо­соб высокочувствителен однако есть данные о наличии количества bcr-abl у здоровых доноров. Нами был разработан метод иммунохимической детекции р210 формы Всr/Аbl белка с использованием поликлональных анти­тел для Dbl-домена этого белка, Для этого; Dbl-домен bcr-abl гена размером 864 п. о. был амплифицирован методом ОТ-ПЦР и клонирован в вектор рЕТ32b. Белок размером 55 кДа экспрессировался клетками BL21(DE3),: был очищен до чистоты 80-85% и использован для получения поликлональных антител. Тест-система на основе иммуноблоттинга в комплексе с ПЦР-подходом позволит проводить комплексную диагностику ХМЛ и ОЛЛ, оценивать эффективность терапии и прогнозировать дальнейшее протекание заболевания.

 

Волкова И., Дубровская А., Телегеев Г.Д., Дыбков М.В.

Институт молекулярной биологии и генетики НАН Украины, Киев (Украина)