Вы здесь

Главная

Клеточная локализация и взаимодействие гликозилтрансфераз биосинтеза экзополисахарида Rhizobium leguminosarum

ID_Статьи: 
1.00

Анализ структурно-функциональной организации генов биосинтеза внеклеточного гетерополисахарида (ЭПС) Rhizobium leguminosarum в совокупности с данными о пути его биосинтеза позволил выдвинуть гипотезу о том, что синтез полисахаридов осуществляется с участием мультиферментного комплекса, сборка которого происходит на цитоплазматической мембране. С целью изучения структурной организации комплекса определена клеточная локализация гликозилтрансфераз (ГТ), катализирующих первые этапы сборки октасахаридного звена полимера. Клеточную локализацию ферментов определяли с использованием аффинно очищенных поликлональных антител, полученным к ГТ, выделенным и очищенным из клеток Е. coli - продуцентов. В результате показано, что гликозилтрансферазы PssA, PssC и две субъединицы глюкуронозил-((b1—>4)-глюкозилтрансферазы - PssD и PssE -имеют мембранную локализацию. Эксперименты по обработке мембран растворами солей и детергентами свидетельствуют о том, что PssA, PssD и PssC являются интегральными, a PssE - периферическим мембранным белком.

Для изучения взаимодействия ГТ in vivo применен метод биолюминесцентного резонансного переноса энергии. С этой целью на основе совместимых репликонов сконструированы рекомбинантные плазмиды, содержащие слитые гены ГТ и фотобелков Rluc и EGFP под контролем промотора фага Т7. В результате показано, что при экспрессии слитых генов в клетках Е. coli синтезируются стабильные гибридные белки, ассоциированные с мембраной. Показана функциональная активность фотобелков Rluc и EGFP в составе гибридов в клетках Е. coli. Обсуждаются данные о взаимодействии гликозилтрансфераз биосинтеза ЭПС.

 

Анедченко Е.А.2, Тарасенко И.В.1, Паршин А.В.2, Марченков В.В.2

1Институт биохимии и физиологии микроорганизмов им. Г.К.Скрябина РАН, Пущино (Россия)

2Институт белка РАН, Пущино (Россия)