Вы здесь

Главная

Изучение структуры ингибиторов протеиназ типа кунитца из клубней картофеля методом молекулярного клонирования

ID_Статьи: 
164.00

Различающиеся по структуре и специфичности ингибиторы протеиназ се­мейства Куница широко распространены в тканях растений, в том числе, в клубнях картофеля (PKPIs). Хотя в настоящее время клонировано более 20 ин­дивидуальных генов PKPIs, феномен множественности их локусов в геноме картофеля изучен фрагментарно. Важной проблемой является недостаток дан­ных, позволяющих связать структуру гена и кодируемого им продукта со специ­фичностью действия на ферменты. Один из подходов к решению этой пробле­мы связан с созданием системы гетерологичной экспрессии клонированных генов, которая до настоящего времени отсутствует.

На основе литературных данных была разработана универсальная система, позволяющую в короткие сроки клонировать всю совокупность генов семей­ства PKPIs в тех или иных штаммах и провести ее тестирование на модельном объекте. Для этого были созданы универсальные олигонуклеотидные праймеры, специфичные к высоко консервативным фланговым последовательностям ге­нов, представляющих все известные группы PKPIs. Фрагменты ДНК, выделен­ные из клубней картофеля сорта Истринский с помощью этих праймеров, были клонированы в стандартный вектор pUK21 и секвенированы. Были выявлены группы клонов, соответствующие двум генам, которые гомологичны, но не иден­тичны, генам известных представителей PKPI. Восстановлены аминокислот­ные последовательности предполагаемых белков, кодирующиеся этими генами. На основании анализа полученных нуклеотидных и соответствующих им ами­нокислотных последовательностей клонированные гены были отнесены к группе В составе семейства PKPIs.

 

Сперанская А.С.1, Дорохин А.В.2, Шевелев А.Б.2, Валуева Т.А.1

1 Институт биохимии им. А.Н. Баха РАН, Москва

2 Институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов, Москва