Вы здесь

Главная

Изучение регуляции транскрипции и функциональная характеристика продукта трансляции гена ygjG Е. coli К12

ID_Статьи: 
147.00

Ранее нами была клонирована открытая рамка считывания (ORF) гена ygjG штамма Escherichia coli К12, аннотированная как орнитин:б-кетоглутарат ами-нотрансфераза (ОАТ, ЕС. 2.6.1.13). Анализ регуляторной области ygjG выявил наличие консенсусных последовательностей у54 промотора и двух сайтов свя­зывания регулятора азотного обмена NRr Индукция транскрипции ygjG в усло­виях азотного голодания экспериментально подтверждена в опытах по экспрес-. сии слитого гена lacZ с различными делёционными вариантами регуляторной области ygjG. Также нами была определена точка инициации транскрипции мРНК гена ygjG. Достигнута высокоэффективная экспрессия слитого с His-Tag лидером YgjG (HTYgjG). При изучении очищенного препарата HTYgjG была обнаружена путресцин:б-кетоглутарат аминотрансферазная активность фермента (PAT; ЕС 2.6.1.29). При этом ОАТ активность HTYgjG была существенно ниже, чем PAT.

Также, осуществлена высокоэффективная экспрессия гена ygjG под контро­лем промотора РТ7 на векторе рЕТ22b(+). Разработан метод выделения натив-ного белка. Установлено, что очищенный препарат YgjG катализирует перенос аминогруппы путресцина, кадаверина, орнитина на б-кетоглутарат; ОАТ актив­ность YgjG незначительна. На основании полученных экспериментальных дан­ных мы полагаем, что белок, кодируемый геном ygjG, является путресцин:б-ке-тоглутарат аминотрансферазой - одним из ферментов катаболизма аргинина в Е. coli. Полученный нами препарат очищенного YgjG может быть использо­ван для дальнейших исследований структурно-функциональных характеристик этого фермента.

 

Самсонова Н.Н., Смирнов С.В., Альтман И.Б., Птицын Л.Р.

Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика, Москва