Вы здесь

Главная

Изучение комплексов теломерных d(TTAGGG)4, d(TTAGGG)3 и d(GT)12 олигонуклеотидов с пептидным вектором pGEk - переносчиком олигонуклеотидов в ядра клеток

ID_Статьи: 
5.00

В последние годы было установленно, что в процессах функционирования теломер принимают участие высоко организованные структуры теломерных ДНК в комплексе со специфическими белками. Повышенный интерес к третичным структурам теломер был вызван исследованиями, в которых доказано, что полиморфизм структур теломерных концов ДНК играет важную роль в процессах старения клеток и развитии онкогенеза. Г.Е. Позмоговой был сконструирован новый пептидный вектор pGEk, способный переносить d(TTAGGG)4 олигонуклеотиды в ядра клеток, что приводило к подавлению роста клеток аденокарциномы молочной железы человека линии MCF-7. Мы изучили характер и стехиометрию связывания пептидного вектора pGEk с G-квадруплексом, образованным теломерным олигонуклеотидом d(TTAGGG)4. Для сравнения были исследованы комплексы pGEk с tio-d(TTAGGG)4 и d(TTAGGG)3 олигонуклеотидами, а также с денатурированной нитью d(GT) 2. Адсорбцию пептидного вектора pGEk на этих олигонуклеотидах, изучали двумя независимыми флуоресцентными методами, используя собственную флуоресценцию триптофановых остатков (Try) pGEk и поляризованную флуоресценцию интеркалированного в олигонуклеотиды этидия бромида (Et). Установлено, что связывание pGEk с G-квадруплексом является кооперативным: коэффициент кооперативности а = 3.5 ± 0.5; константа ассоциации К = (5.0 ± 0.5)106 М1; число мест связывания N = 4. В отличие от d(TTAGGG)4, олигонуклеотиды tio-d(TTAGGG)4 d(TTAGGG)3 и d(GT)12 связывались с PGEk с константами на порядок ниже, что свидетельствовало о высоком сродстве молекул pGEk к G-квадруплексу. Анализ спектров кругового дихроизма (КД) G-квадруплекса в области 290 нм, позволил нам сделать вывод о способности молекул pGEk частично разворачивать четверную спираль G-квадруплекса. На основании полученных данных установлено, что пептидный вектор pGEk способенн переносить в ядра клеток олигонуклеотид d(TTAGGG)4 при этом сильно не изменяя его квадруплексную структуру.

 

Бессчётнова И.А., Позмогова Г.Е.1, Щёлкина А.К., Борисова О.Ф.

1Институт молекулярной биологии им. В. А. Энгельгардта РАН, Москва (Россия)

2Центр «Биоинженерия» РАН, Москва (Россия)