Вы здесь

Главная

Исследования методом поверхностного плазмонного резонанса указывают, что изолированные субъединицы а-кристаллина не способны связывать развернутые белки

ID_Статьи: 
1.00

а-Кристаллин хрусталика, относящийся к семейству малых белков теплово­го шока (sHSP), in vivo образует олигомеры, состоящие из 32-40 субъединиц. Связывая частично развернутые формы белков, образующиеся в стрессовых ус­ловиях и склонные к агрегации, а-кристаллин предотвращает образование агре­гатов. Для понимания механизма действия олигомерных sHSP очень важным представляется вопрос о наличии «шаперон-подобной» активности у отдельных субъединиц. Исследования свойств субъединиц а-кристаллина при физиологи­ческих условиях ранее не проводили, поскольку не удавалось достичь диссоциа­ции его на субъединицы, не затрагивая пространственную структуру отдельных субъединиц. Иммобилизация субъединиц на нерастворимом носителе с после­дующим их изучением при условиях, близких к нативным, представляется наи­более адекватным подходом в данном случае. Связывание частично разверну­тых белков с иммобилизоваными субъединицами а-кристаллина, а также с оли-гомерным а-кристаллином, изучали методом поверхностного плазменного резо­нанса (ППР). Отдельные субъединицы а-кристаллина были иммобилизованы в присутствии катионного детергента цетил-пиридиний-бромида. Для проверки сохранения иммобилизоваными субъединицами нативной конформации, олиго­меры а-кристаллина были реконструированы на поверхности сенсора с вклю чением иммобилизованых субъединиц в состав олигомеров. Мы наблюдали, что иммобилизованные субъединицы а-кристаллина, в отличие от иммобили­зованных олигомеров, при физиологических условиях не связывают частично развернутые белки (бычий сывороточный альбумин и лизоцим). Наши данные указывают, что сохранение четвертичной структуры необходимо для «шаперон-подобной» активности а-кристаллина. Мы предполагаем, что в образовании каждого субстрат-связывающего сайта а-кристаллина участвуют поверхности нескольких субъединиц.

 

Авилов С.В.1, Демченко А.П.1,2

1 Институт биохимии им. А.В. Палладина НАН Украины, Киев

2 TUBITAK, Marmara Research Center, Gebze-Kocaeli, Turkey