Вы здесь

Главная

Исследования механизмов эндоцитоза на трансфекантных клетках, экспрессирующих различные формы рецептора ЭФР

ID_Статьи: 
177.00

Взаимодействие ЭФР с рецептором стимулирует, поступление ЭФР-рецеп-торных комплексов внутрь клетки с помощью рецептор-опосредованного эндо-цитоза. После связывания лиганда с рецептором ЭФР-рецепторные комплексы интернализуются и попадают в ранние эндосомы, где происходит их сортиров­ка: часть комплексов рециклирует на плазматическую мембрану, а остальные попадают в поздние эндосомы, после чего деградируют в лизосомах. На ранних этапах рецептор остается долгое время экспонирован в цитоплазму своим С-концевым участком, который содержит активированный тирозинкиназный до­мен и сайты автофосфорилирования. Для исследования механизмов сортиров­ки мы использовали набор трансфектантных клеток, экспреесирующих различ­ные формы рецептора ЭФР: нормальный (клетки HER14), лишенный нескольких сайтов автофосфорилирования (клетки CD63), рецептор, лишенный ТК активно­сти (клетки К721) и рецептор с заменой остатков тирозина (Y1148 и Y1172) на фенилаланин (клетки MI33). С помощью фракционирования в градиенте плот­ности Перколла мы обнаружили, что в случае нормального рецептора значи­тельная часть ЭФР-рецепторных комплексов поступает в ранние эндосомы, за­тем в поздние и, в конце концов деградирует в лизосомах, тогда как рецептор, лишенный ТК активности, практически полностью остается ассоциирован с ранними эндосомами даже при длительных сроках инкубации. Исследования, проведенные на клетках, трансфицированных рецептором, с мутациями по двум сайтам автофосфорилирования (клетки MI33), показали, что лиганд-рецептор-ные комплексы в процессе прохождения по эндоцитозному пути достигают ранних эндосом. Однако, несмотря на уровень деградации соизмеримый с клет­ками трансфицированными нормальным рецептором, лиганд-рецепторные комп­лексы не детектируются в поздних эндосомах. Нами планируются дальнейшие исследования.

 

Филатова М.М.. Корнилова E.G.

Институт цитологии РАН, Санкт-Петербург