Вы здесь

Главная

Исследование взаимодействия элементов Т-комплекса агробактерий с модельными мембранами

ID_Статьи: 
113.00

Одно нитчатая Т-ДНК агробактерий способна в комплексе с белками вирулентности VirE2 и VirD2 пересекать мембрану и цитоплазму растительной клетки и встраиваться в хромосому хозяина. В настоящее время механизм этого явления неизвестен. Установлено, что короткие олигонуклеотиды могут переноситься через белковую пору, образуемую VirE2-белком в плоских мембранах (Dumas et al., 2001). Целью данной работы было исследование взаимодействия элементов Т-комплекса с плоскими модельными мембранами.

При формировании мембраны и определении ее устойчивости во времени использовались следующие концентрации липидов: фосфатидилхолин от 50% до 100%, фосфатидилэтаноламин от 25% до 75%, фосфатидилглицерол от 1% до 10% (соотношения рассчитывались согласно составу мембраны растительной клетки). В результате экспериментов было выявлено, что соотношение фосфатидилхолин 63,5%, фосфатидилэтаноламин 30%, фосфатидилглицерол 6,5% наиболее оптимально по составу и устойчивости. Установлены наивысшие критические концентрации ss-белка из Е. colu VirE2-белка, Т-комплекса (собранного) и однонитчатой Т-ДНК из Agrobacterium tumefaciens, при которых мембрана разрушается (препараты Т-ДНК и VirE2-белка были любезно предоставлены Сазоновой И.А.). В частности, при концентрации VirE2-белка 16 нг/мкл мембрана теряет устойчивость и распадается. При концентрациях Т-ДНК (около 15000 п.н., фрагмент плазмиды pBISNc) менее -0,06 нг/мкл мембрана ведет себя довольно устойчиво, выше 0,1 нг/мкл устойчивость теряется.

 

Бурматов А.В., Волохина И.В., Чумаков М.И.

Институт биохимии и физиологии растений и микроорганизмов РАН, Саратов