Вы здесь

Главная

Исследование возможности получения трансгенных мышей методом микроинъекции предъинтеграционных комплексов на основе бактериофага Мю в цитоплазму зиготы мыши

ID_Статьи: 
145.00

Одним из важнейших методов современной молекулярной биологии и биотехнологии является метод получения трансгенных животных. Тем не менее, эффективность получения некоторых линий трансгенных мышей и крупных сельскохозяйственных животных остается крайне низкой, а некото­рые виды трансгенных животных (например, планарии) вообще не удается получить.

Основной причиной низкой эффективности получения трансгенных жи­вотных является небольшая вероятность интеграции инъецированной ДНК в геном животных. Для повышения эффективности интеграции мы исследова­ли возможность использования комплексов ДНК с транспозазой МuА бакте­риофага Мu (предоставленной фирмой Finnzymes). Мы показали, что в реак­циях in vitro сформированные комплексы с транспозазой МuА способны ин­тегрировать в ДНК-мишень с эффективностью как минимум в 50 раз боль­шей, чем ДНК без транспозазы. Сформированные комплексы инъецировали в цитоплазму зигот мыши на стадии двух пронуклеусов. Инъецированные эмб­рионы культивировали in vitro в течении 5 дней до стадии бластоцисты/мо-рулы. Процент инъцированных зигот, развившихся до стадии бластоцисты/-морулы, практически не отличался от аналогичного процента не инъецирован­ных зигот, что свидетельствуют о нетоксичности проводимых инъекций. Пос­ле трансплантации полученных бластоцист ложнобеременным самкам роди­лось 4 мышонка и, по результатам ПЦР-анализа, полученные мышата не содер­жали трансгена. В дальнейшем планируется проведение инъекций в пронук-леусы зигот а так же изучение влияния концентрации инъецированных комп­лексов и времени, когда производят инъекции, на эффективность получения трансгенных мышей.

 

Рябова А.В., Ходарович Ю.М., Ларионов О.А.

Институт биоорганической химии РАН