Вы здесь

Главная

Исследование некоторых неохарактеризованных генов E. coli, которые могут кодировать транспортеры аминокислот

ID_Статьи: 
67.00

Плазматическая мембрана E.coli содержит белки, составляющие основу транспортных систем, жизненно важных для проникновения внутрь питательных веществ, поддержания клеточного гомеостаза, а также для выведения наружу токсичных соединений. Изучение таких систем представляет широкий научный интерес, о чем говорит все увеличивающееся количество публикаций по данному вопросу.

Задача данной работы заключалась в обнаружении новых генов E.coli, принимающих участие в транспорте аминокислот.

На основании сравнительного анализа генома E.coli с геномами других микроорганизмов отобрано 30 гипотетических белков E.coli, имеющих гомологию с известными транспортерами или компонентами систем множественной лекарственной устойчивости. Гены, кодирующие отобранные белки, амплифицировали с помощью ПЦР и клонировали на мультикопийных плазмидах. Полученные плазмиды вводились в клетки штамма E.coli TGI и изучалось изменение чувствительности бактерий к ингибирующим концентрациям веществ различной химической природы (аналогам аминокислот, антибиотикам, детергентам и т.п.; всего 50 соединений). В результате были обнаружены гены, амплификация которых значительно влияла на устойчивость бактерий к исследуемым веществам. В частности, 14 исследуемых генов изменяли чувствительность клеток к аминокислотам и их аналогам, что предполагает их участие в транспорте этих аминокислот. Действительно, прямые эксперименты с мечеными аминокислотами показали, что 5 таких плазмид (с клонированными генами ybiF, yhgN, yfbS, Ь2372 и опероном b 1643-45) влияют на скорость поглощения некоторых аминокислот клетками штамма E.coli TGI.

Таким образом, показано, что при амплификации исследованных генов E.coli наблюдается изменение уровня устойчивости модельного штамма TG1 к ингибирующим концентрациям некоторых аминокислот и их аналогов, а также скорости поглощения ряда аминокислот клетками этого штамма. Полученные данные не позволяют сделать однозначного вывода о том, что исследуемые гены кодируют аминокислотные транспортеры. Тем не менее, проделанная работа позволяет выделить ряд генов для дальнейших исследований.

 

Рыбак К.В., Сливинская Е.А., Хургес Е.М.

Закрытое акционерное общество "Научно-Исследовательский Институт Аджиномото-Генетика". Москва (Россия)