Вы здесь

Главная

Исследование механизмов выхода митохондриальной ДНК в цитозоль

ID_Статьи: 
41.00

Митохондрия - сложная многофакторная органелла, включающая в свой состав все виды биологических макромолекул. Известно, что часть регуляции жизнедеятельности как непосредственно митохондрии, так и связанных с ней клеточных процессов осуществляется при помощи мембранных компонентов митохондрии, к которым относится и неспецифическая пора (РТР). Основные детали функционирования РТР хорошо изучены, однако ее взаимодействие с митохондриальной ДНК неизвестно.

Целью нашей работы являлось исследование участия РТР в выходе митохондриальной ДНК в цитоплаз-матическую фракцию печени мышей.

Митохондрии печени мышей линии Black С57 выделялись методом стандартного дифференциального центрифугирования в среде, содержащей сахарозу. Мембранный потенциал регистрировался и определялся дыхательный контроль в присутствии флуоресцентных зондов в среде для дыхания, содержащей сукцинат. Открытие РТР вызывали добавлением Са2+, закрытие - Циклоспорином А. Митохондриальная ДНК (мтДНК) выделялась с использованием магнитных сорбентов. Методом ПЦР с праймерами, специфичными к митохондриальной ДНК мышей, исследовали кинетику выхода ДНК из митохондрий в зависимости от состояния РТР.

Обнаружено, что при выделении митохондрий в среде присутствуют фрагменты мтДНК. Открытие РТР приводит к увеличению количества фрагментов мтДНК.

Размер амплифицированных фрагментов, обнаруженных в цитозольной фракции, достигал величины 2000 пн, фрагменты величиной свыше 2000 обнаружены не были.

Делается вывод, что в условиях проводимости РТР имеет место выход фрагментов митохондриальной ДНК в клеточный цитозоль.

 

Касымов В.А.1, Патрушев М.В.2, Зобова В.Е.2, Ушакова Т.Е.2 1Институт биофизики клетки РАН, Пущино (Россия)

2Институт теоретической и экспериментальной биофизики РАН, Пущино (Россия)