Вы здесь

Главная

Исследование механизмов обеспечивающих сегрегационную стабильность линейной плазмиды N15

ID_Статьи: 
13.00

Целью нашей работы является исследование механизмов стабильного наследования линейных бактериальных репликонов на примере бактериофага N15. Уникальной особенностью N15 является то, что в лизогенном состоянии он не интегрируется в хромосому Е. coli, а представляет собой линейную плазмиду с ковалентно замкнутыми концами (теломерами). Мы установили, что стабильное наследование плазмиды N15 обеспечивается активным распределением реплицированных молекул между дочерними клетками перед делением. Эту функцию обеспечивает локус sop, гомологичный sop локусу F-фактора. Как правило, sop локусы включают в себя оперон из двух генов, sopA и sopB, и примыкающий к ним центромерный сайт. Мы установили, что sop-оперон N15 транскрибируется с двух промоторов: первый функционально гомологичен Psop промотору плазмиды F и репрессируется Sop-белками; второй, более активный промотор, не контролируется Sop-белками, но может быть репрессирован протеломеразой N15, -ферментом, образующим ковалентно замкнутые теломеры. Другой особенностью N15 является наличие четырех центромер, расположенных в разных частях генома, в районах существенных для репликации и контроля экспрессии "поздних" генов фага. Мы установили, что для стабильного наследования линейной плазмиды требуется несколько сайтов (для кольцевой достаточно одного), причем они должны быть расположены в различных частях молекулы. Мы полагаем, что это обеспечивает компактизацию линейной молекулы N15 за счет взаимодействия Sop белков, связанных с каждой центромерой, что в кольцевых плазмидах обеспечивается сверхспирализацией. Мы обнаружили, что связывание Sop белков с одной из центромер активирует репликацию и увеличивает число копий плазмиды. Таким образом, в отличие от sop-оперонов кольцевых плазмид, являющихся независимыми функциональными единицами, N15 sop является частью единой системы, включающей сегрегационную стабильность, репликацию ДНК и образование теломер.

 

Дорохов Б.Д., Равин Н.В.

Центр "Биоинженерия" РАН, Москва (Россия)