Вы здесь

Главная

Исследование механизма локализации мрнк и картины экспрессии белкового продукта нового гена Germes в ооцитах и эмбрионах X. Laevis

ID_Статьи: 
30.00

Новый маркер половой плазмы X. laevis экспрессируется в ооцитах и ранних зародышах. В оогенезе происходит локализация транскрипта в митохондриальное облако, а затем, в его составе, на вегетативный полюс ооцита. Изучение процессов локализации транскриптов является актуальной проблемой, поскольку выявляет закономерности не только формирования половой плазмы, но и механизмов клеточного транспорта в целом. Кроме того, представляется интересным изучение пространственной локализации белкового продукта нового гена Germes, поскольку она может отличаться от локализации его транскрипта. Целью настоящего исследования является изучение механизма локализации мРНК нового гена Germes в ооцитах и эмбрионах X. laevis.

Для поиска регуляторных цис-элементов, управляющих транслокацией РНК Germes в митохондриальное облако и на вегетативный полюс, предполагается сделать набор конструктов, кодирующих мутантные РНК, содержащие различные делеций в З'-нетранслируемой области. К настоящему времени получены экспрессионные конструкты: рС82+полноразмерный ген; рС 82+код ирующая рамка гена и pCS2+3'- нетранслируемая область к ДНК гена. Для получения мутантных конструктов проведен рестрикционный анализ 3' - нетранслируемой области.

Для изучения картины экспрессии белкового продукта Germes, получен конструкт: pBAD вектор +N-концевая часть Germes, позволяющий экспрессировать в E.coli рекомбинантный белок (~1 kb последовательности с N-конца, не содержащая гомологичных мотивов) с 6x(His) и с с-Мус эпитопом на С-конце, необходимые для очистки и выявления белка. Таким образом, этим очищенным белком были иммунизированы кролики и получен первый иммунный ответ. Для очистки специфических антител из сыворотки животных, с помощью иммуно-афинной хроматографии, будет использован уже приготовленный конструкт: pGEX-5X-l +N-концевая часть Germes экспрессирующий рекомбинантный белок с GST (glutathione S-transferase) на N- конце.

 

Пономарев М.Б.1, Лучинская Н.Н.1,2, Белявский А.В.1

1Институт молекулярной биологии им. В.А. Энгельгардта РАН, Москва

2Московский Государственный Университет им. М.В. Ломоносова, Москва