Вы здесь

Главная

Исследование локализации белка - рецептора цитокининов ЦСБ-70 в клетке Zea mays L. иммунохимическими методами

ID_Статьи: 
22.00

Ранее из этиолированных проростков кукурузы был выделен и охарактери­зован как гормон-зависимый транскрипционный фактор цитокинин-связывающий белок 70 кД (ЦСБ-70). Для исследования механизма его работы необходи­мо установить внутриклеточную локализацию белка. Объектом настоящего исследования являлся четырехдневный проросток кукурузы.

Первая часть работы включала фракционирование клеточных компонентов листа проростка и иммуноблоттинг ядерных, пластидных и цитоплазматических белков с использованием панели моноклональных антител к ЦСБ-70. Раствори­мые белки цитоплазмы и белки, связанные с цитоскелетом, исследовались отдель­но друг от друга. Помимо ЦСБ-70, выявленного во всех фракциях, в цитозоле был обнаружен белок с молекулярным весом около 90 кД, также узнаваемый специ­фичными антителами. По нашим предположениям, белок 90 кД может являться либо предшественником ЦСБ-70, либо его модифицированной формой. Весьма неожиданным оказалось наличие обоих белков во фракции пластид.

Во второй части исследования было проведено выявление рецептора в клет­ке методами иммуноцитохимии и световой микроскопии. При использовании некоторых моноклональных антител было подтверждено наличие ЦСБ-70 как в этиопластах надземной части растения, так и в амилопластах чехлика корня. Любопытно то, что на срезах верхней части проростка наибольшее количество исследуемого белка выявляется в пластидах второго листа. Учитывая, что цито-кинины являются гормонами, принимающими участие в делении, дифференци-ровке клеток и развитии пластидного аппарата, мы допускаем, что такое увели­чение содержания рецептора связано с определенной стадией развития орга-нелл или клетки в целом.

 

Васильева B.C.1,2, Сенина А.Л.3, Овчинникова Е.В.1

1 Филиал института биоорганической химии РАН, Пущино

2 Институт теоретической и экспериментальной биофизики РАН, Пущино

3 Уральский государственный университет, Екатеринбург