Вы здесь

Главная

Исследование экспрессии органофосфатгидролазы в клетках E.coli

ID_Статьи: 
45.00

Органофосфатгидролаза (ОРН) (Е 3.1.8.1.) осуществляет гидролиз фосфотриэфирных связей в фосфорорганических соединениях, к числу которых относятся пестициды, широко используемые в сельском хозяйстве и представляющие серьезную экологическую опасность.

Для высокоэффективной экспрессии ОРН получена уникальная экспрессионая плазмид а, позволяющая обеспечивать синтез рекомбинантного фермента в количестве до 50% от суммарного клеточного белка. Была исследована кинетика накопления продукта экспрессии в клетках Е. coli и проведен анализ растворимости получаемой ОРН при разных температуратурных режимах культивирования и при различных индукционных режимах и условиях проведения индукции синтеза белка. Полученные электрофоретические данные по растворимости ОРН в клеточных лизатах полностью коррелировали с измерениями каталитической активности клеток, которые свидетельствовали о том, что для синтеза растворимой формы ОРН оптимальной температурой является 30°С и концентрация индуктора - 0,2 мМ.

Изучение влияния цитоплазматических шаперонов на фолдинг ОРН в клетках E.coli было проведено с использованием двух систем шаперонов GroEL и GroES, а также DnaJ, DnaK и GrpE. Было показано, что коэкспрессия с шаперонами системы GroELS приводит к 2-кратному увеличению количества растворимого белка. Вместе с тем уровень растворимости рекомбинантного фермента практически не зависит от коэкспрессии с шаперонами системы DnaJK-GrpE, что свидетельствует о доминировании посттрансляционного механизма фолдинга данного фермента.

 

Вотчицева Ю.А, Алиев Т.К., Ефременко Е.Н.

Кафедра химической энзимологии, Химический факультет МГУ им. М.В. Ломоносова, Москва (Россия)