Вы здесь

Главная

Использование метода RAPD-ПЦР для изучения ДНК-полиморфизма в онтогенезе мыши и при злокачественном росте

ID_Статьи: 
5.00

RAPD-ПЦР широко используется в генетическом картировании различных групп организмов, а также в популяционных и эволюционных исследованиях.

Целью данной работы явилась апробация метода RAPD-ПЦР для выявления полиморфизма генома мыши на разных стадиях онтогенеза и при опухолевой трансформации. Для изучения ДНК-полиморфизма в онтогенезе мыши были использозаны органы и ткани эмбрионов в возрасте 15 и 20 сут развития и взрослых особей 5-6-месячного возраста беспородных мышей и мышей линии C57BL/6. Выявление генетического полиморфизма при злокачественном росте выполнялось на клонах и клоновых линиях гепатомы МГ-22а in vitro, а также in vivo при трансплантации клонов гепатоцитов в переднюю камеру глаза (ПКГ) и подкожную соединительную ткань (ПСТ).

Выделение тотальной ДНК из различных органов и тканей мышей и опухоле­вых гепатоцитов проводили с помощью фенольно-хлороформной экстракции ДНК по стандартной методике. Генетическую гетерогенность выявляли с помощью RAPD-ПЦР с использованием трех случайных праймеров. Этот метод позволил получить спектры амплифицированных фрагментов ДНК во всех исследован­ных образцах. При этом спектры, полученные при использовании разных прайме­ров, различались по количеству фрагментов ДНК и по их вариабельности.

Метод RAPD-ПЦР, впервые примененный для изучения ДНК-полиморфизма в эмбриогенезе млекопитающих, позволил выявить генетическую вариабельность на всех исследуемых сроках. Гетерогенность популяции гепатомы МГ-22а по ге­нетической вариабельности была выявлена с помощью RAPD-ПЦР в клонах и клоновых линиях in vitro, а также при их трансплантации in vivo в ПКГ и ПСТ.

Полученные данные позволяют судить о перспективности использования метода RAPD-ПЦР для изучения генетической вариабельности у млекопитаю­щих на протяжении всего онтогенеза, а также при злокачественном росте.

 

Александрова С.А.

Институт цитологии РАН, Санкт-Петербург