Вы здесь

Главная

Использование ESI-MS для определения количества белков

ID_Статьи: 
116.00

В настоящее время современные масс-спектрометрические методы такие как ESI-MS (Electrospray Ionization Mass-Spectrometry) и MALDI-MS (Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionization Mass-Spectrometry) являются ключевыми в изучении протеом. Они позволяют, на субпикомольном уровне, быстро и надеж­но идентифицировать индивидуальные компоненты протеом - белки. Но для понимания физиологических процессов, происходящих в клетке, на молекуляр­ном уровне важна не только идентификация белков, но и их количественное определение. Для этих целей нами предлагается также использовать один из масс-спектрометрических методов, а именно ESI-MS. В основе предлагаемого нами подхода лежит масс-спектрометрическое определение концентрации бел­ков по содержанию в них отдельных аминокислот, концентрация которых мо­жет быть вычислена из соотношения интенсивностей моноизотопных ионов отдельных аминокислот и их стандартов, содержащих стабильные.изотопы. Для реализации предложенного подхода были отработаны условия подготовки об­разцов индивидуальных белков к анализу, а также условия получения необходи­мых стандартов. Предложенный подход апробирован на примере определения концентрации (количества) модельных белков в растворе и в ПААГ.

 

Новиков А.В.1 , Краснов Н.В.1, Савельева Н.В.2, Миргородская O.A.2

1 Институт аналитического приборостроения РАН, Санкт-Петербург

2 Институт цитологии РАН, Санкт-Петербург