Вы здесь

Главная

Использование аминооксиуксусной кислоты как ингибитора аминотрансфераз при селективном включении 15N изотопа в последовательность синтезируемого белка

ID_Статьи: 
129.00

Большая часть микроорганизмов способна производить весь набор аминокис­лот и, следовательно, располагает набором всех ферментов, необходимых для био­синтеза. При этом клетка параллельно использует для синтеза целевого белка как собственный пул аминокислот, так и аминокислоты из среды роста. Нашей зада­чей было получение внутриклеточного ингибитора РНКаз, белка, барстара селек­тивно меченного 15N изотопом в экспрессионной системе на основе Е. coli. Так как мы работаем с неауксотрофным штаммом E. coli BL2l(DE3) необходимо отметить, что в клетке одновременно протекают процессы деградации и биосин­теза всех аминокислот. Внесенная с среду роста l5N- аминокислота подвергается деградации и на первой же стадии происходит отщепление аминогруппы содер­жащей стабильный изотоп от углеродного остова молекулы аминортансфераза-ми. Судя по имеющимся данным, трансаминазы содержат один и тот же кофер-мент, и для катализируемых ими реакций характерен общий механизм. Этим коферментом является пиридоксальфосфат. Он действует как переносчик ами­ногрупп, при этом, наиболее важную роль играет его альдегидная группа, обладаю­щая способностью обратимо реагировать с различными аминами. Использование аминооксиуксусной кислоты в качестве ингибитора пиродоксальфосфатзависи-мых ферментов (аминотрансфераз и декарбоксилаз) позволяет избежать пере­распределения 15N изотопа при синтезе целевого белка. Блокирование работы трансаминаз в определенный момент биосинтеза снижает степень перераспре­деления изотопной метки среди вновь синтезируемых аминокислот, что ведет к селективному включению 15N аминокислоты в полипептид.

 

Пономарева А.А., Лопухов Л.В., Ягодина Л.О.

Казанский институт биохимии и биофизики КНЦ РАН, Казань