Вы здесь

Главная

Инвертаза дрожжей Klyuveromyces marxianus Y-303: получение и некоторые физико-химические свойства

ID_Статьи: 
115.00

Способы получения препаратов инвертазы из дрожжей разнообразны, однако наиболее часто ферменты получают в виде очищенных препаратов. Выделение и очистка ферментных препаратов от примесей - важный этап в изучении их свойств. Глубокие и всесторонние исследования общей структуры фермента, функциональных групп, механизма действия возможно только с очищенным препаратом.

С этой целью нами был выбран эффективный способ очистки инвертазы Klyuveromyces marxianus Y-ЗОЗ. Фермент из биомассы дрожжей извлекали методом автолиза при температуре 40 °С и осаждали 96 % этиловым спиртом при содержании его в смеси 67 % и величине рН автол изата 5,0. Выход фермента по активности составлял 95 %. Освобождение полученного препарата от низкомолекулярных примесей осуществляли путем диализа против 20 мМ Трис-НС1-буфера рН 7,4. Дальнейшая более тонкая очистка включала следующие стадии: ионообменную хроматографию наВЕАЕ-сефадексе, гель-хроматографию на TSK-DEAE-5PW и гель-фильтрацию Sephacryl S-200. В результате 5 этапов очистки был получен гомогенный препарат со степенью очистки 144,9 раза и выходом по активности 75 %. Удельная активность фермента составляла 2720 ед на 1 мг бежа.

Молекулярную массу фермента определяли двумя методами: электрофорезом в присутствии додецилсульфата натрия и гельфильтрацией на колонке Sephacryl S-200 (IPharmacial, Швеция), используя набор молекулярно-весовых стандартов. В результате было установлено, что фермент имеет субъединичную структуру и является димером с молекулярной массой 260 кДа. Среди аминокислот, содержащихся в препарате преобладающими являются аспарагиновая и глютаминовая, что не отличается от известных дрожжевых инвертаз.

Максимальную инвертазную активность 10032 ед на 1 мг бежа фермент проявлял при температуре 50 °С и величине рН 4,0 на сахарозе, инулиназную -1100 ед на 1 мг бежа при 55 °С и рН 5,0. Установлено, что фермент наиболее стабилен при величине рН 4,0 и температурах 30-40 °С.

 

Мальцева Т.В., Корнеева О.С.

Воронежская государственная технологическая академия.