Вы здесь

Главная

Идентификация функциональных групп липазы Rhizopus japonicus

ID_Статьи: 
95.00

Липолитические ферменты представляют интерес не только в связи со своей биологической ролью, но и практическим использованием в биотехнологии, медицине, пищевой, текстильной, парфюмерной промышленности.

Модификация ферментов позволяет выявить роль отдельных групп в поддержании конформации, повышении стабильности, регуляторных свойств белков, а также необходима при расшифровке механизма их действия.

Цель настоящей работы -исследование функциональных групп липазы Rhizopus japonicus 1403.

Активность фермента определяли модифицированным методом Ota, Yamada, при температуре 37 °С. В качестве субстрата использовали триолеин в концентрациях от 0,5 до 2,5 мМ. Фотоокисление липазы проводили при освещении лампой дневного света в присутствии 5*10-6 М метиленовой сини; контролем служила проба с фотосенсибилизатором, выдержанная в темноте.

Исследования активности липазы при различных значениях рН и концентрациях субстрата позволили установить рК ионизирующихся групп фермента - это 4,35 и 6,50, которые близки к рК глутаминовой кислоты и гистидина. Для подтверждения участия имидазола в катализе проводили модификацию липазы фотоокислением. Наблюдалась инактивация: за 30 мин потери активности составили 50 %; активность без метиленовой сини и в темноте сохранялась. В связи с тем, что фотоокислению подвергается индольное кольцо триптофана, был изучен процесс фотоинактивации при различных значениях рН от 3,0 до 8,0. Установлено, что он подчиняется закону первого порядка На основании полученных данных были рассчитаны константы скорости инактивации, зависимость которых от рН показала наличие в ферменте ионизирующейся группы с рК 6,4. Таким образом, фотоинактивация липазы Rhizopus japonicus 1403 подтвердила существенную роль гистидина в проявлении каталитической активности липазы.

 

Янышева Н.В., Трофимова О.Д.1, Шеламова С.А., Ковалева Т.А.1 1Воронежский государственный университет, Воронеж 2Воронежская государственная технологическая академия, Воронеж