Вы здесь

Главная

Характеристика b-1,3-глюканазы штамма Bacillus sp. 739

ID_Статьи: 
188.00

Целью нашей работы являлось изучение свойств b-1,3-глюканазы (ламина-риназы) из комплекса внеклеточных ферментов, продуцируемых штаммом Bacillus sp. 739 - антагонистом некоторых фитопатогенных грибов. Комплекс внеклеточных ферментов из культуральной жидкости этого штамма способен разрушать интактный мицелий грибов - возбудителей корневых гнилей пшени­цы (Fusarium culmorum, Helminthosporium sativum, Alternaria alternata и др.).

Ранее нами было обнаружено, что р-1,3-глюканазная активность является конститутивной для штамма Bacillus sp. 739, ибо она в одинаковой мере проду­цировалась на средах с крахмалом и коллоидным хитином в качестве основ­ного источника углерода (1,5-2,5 ед/мл). Выделение b-1,3-глюканазы из куль­туральной жидкости Bacillus sp. 739 осуществляли с помощью осаждения суль­фатом аммония, ионообменной хроматографии (ИОХ) на ДЭАЭ-Сефадексе А-50 и гель-проникающей хроматографии на Сефадексе G-200. В результате ИОХ было выявлено несколько изоформ анионной и катионной b-1,3-глюканазы. Кислая изоформа фермента элюировалась в градиенте 0-0,2 М NaCl в 0,05 М трис-HCl (рН 7,1) в виде двух пиков (pi 6,4 и pi 5,6). Электрофорез в 7,5%-ном ПААГ с 1% ДДС-Na выявил в каждом из них нескольких белковых групп с Mw 90-100 кДа.

Различные изоформы очищенного фермента имели сходные физико-хими­ческие характеристики: температурный оптимум 55-60°С, сохраняли 90-100% от первоначальной активности при 50-60°С (1 ч инкубации) и рН 3,5-8,5 (1-24 ч инкубации). Из всех субстратов b-1,3-глюканаза наиболее активно гидролизо-вала растворимый b-глюкан (Km - 35 мгмл) и ламинарии (Km - 12 мг/мл). Активность ферментов по отношению к Na-КМЦ, хитину и хитозану выявлена не была. Нами было выявлено, что b-1,3-глюканазная активность возрастает в 2-4 раза при наличии в реакционной смеси D-глюкозы в концентрации 50-75 мкг/мл. Было показано также, что этот фермент способен сорбироваться на клеточных стенках мицелия грибов Helminthosporium sativum и Fusarium culmorum, что указывает на его важную роль в процессе миколизиса.

 

Широков А.В., Актуганов Г.Э.

Институт биологии Уфимского научного центра РАН, Уфа