Вы здесь

Главная

Глутамилэндопептидаза Bacillus intermedius 3-19 поздней стационарной фазы роста

ID_Статьи: 
57.00

Нейтральные протеиназы, секретируемые бациллами в поздней стационарной фазе роста, выполняют ряд важных функций в процессе клеточной дифференцировки, в частности, в процессе спорообразования. Имеются данные об участии протеиназ в инициации процесса спорообразования, в процессе лизиса материнской клетки, а также в процессе прорастания спор. Изучение субстратной специфичности и энзиматических свойств внеклеточных протеиназ, позволит приблизиться к решению вопроса о функциональной роли этих ферментов в процессе спорообразования.

Целью настоящей работы явилось выделение, очистка и изучение свойств гомогенных препаратов протеиназ Bacillus intermedius 3-19, секретируемых на поздних стадиях спорообразования.

В процессе изучения динамики роста и биосинтеза протеиназ Bacillus intermedius 3-19 было выяснено, что на поздних стадиях спорообразования бактерии секретируют в среду ферменты с казеинолитической активностью. Посредством хроматографии на КМ-целлюлозе и ВЭЖХ получены 3 белковых пика, из которых второй был идентифицирован как глутамилэндопетидаза с помощью специфического субстрата Z-Glu-pNA. Рехроматографией на колонке MonoS получен гомогенный препарат белка. Гомогенность подтверждена электрофорезом в ПААГ. молекулярная масса белка равна 26,5 кОа. Активность фермента подавляется специфическим ингибитором сериновых протеиназ - диизопропилфторфосфатом (DFP). Другой ингибитор сериновых протеиназ - фенилметилсульфонилфторид (PMSF) оказывает незначительное влияние на активность фермента. На субстрате Z-Glu-pNA рН-оптимум оказался равным 8,5, на казеине были обнаружены два рН-оптимума - рН 7,2 и 9,5. Фермент стабилен в диапазоне рН от 7,0 до 10,0, наличие в реакционной смеси ионов Са2+ повышает рН-стабильность. Температурный оптимум равен 55° С в присутсвии ионов Са2+. Фермент относительно стабилен при температуре 50-55° в присутсвии ионов Са2+, в отсутствии Са2+ активность фермента резко падает. Величина константы Михаэлиса - 0.5 мМ, Kcat - 4865-1. Глутамилэндопептидаза содержит в своем составе 241 аминокислотный остаток.

 

Соколова Е.А., Марданова A.M., Балабан Н.П.

Казанский государственный университет, г. Казань