Вы здесь

Главная

Генетическое конструирование мутантных реакционных центров Rb. sphaeroides

ID_Статьи: 
180.00

Широкие возможности для изучения роли структурных полипептидов реакционных центров (РЦ) пурпурных бактерий представляют методы генетичес­кой инженерии и, в особенности, полимеразная цепная реакция (ПЦР), позволяю­щая делать замены аминокислотных остатков вблизи кофакторов переноса электрона. Данный метод также позволяет присоединять к белкам пептиды, имеющие повышенное сродство к специфическому носителю, что используется для быстрой и эффективной очистки РЦ с помощью аффинной хроматографии. Ранее в нашей лаборатории была получена плазмидная конструкция, содержа­щая puf-оперон Rhodobacter sphaeroides с заменой тирозина на фенилаланин в положении М210 М-субъединицы реакционного центра. В гене L-субъедини-цы нами были произведены нуклеотидные замены, приводящие к замещению фенилаланина в положении L181 на тирозин. Для выделения мутантного РЦ с помощью металло-хелатной хроматографии, перед стоп- кодоном гена М-субъе­диницы была вставлена последовательность, кодирующая шесть остатков гис-тидина. Далее планируется выделение РЦ с двойной мутацией и изучение его спектральных характеристик.

 

Хмельницкий А.Ю., Васильева Л.Г., Шувалов В.А.

Институт фундаментальных проблем биологии РАН, Пущино