Вы здесь

Главная

Генетический контроль экспрессии гена РНО5 в зависимости от качества источника азота в среде у дрожжей Saccharomyces cerevisiae

ID_Статьи: 
44.00

Промотор гена РНОЗ дрожжей Saccharomyces cerevisice широко используется в биотехнологии для гетерологичной экспрессии. Уровень транскрипции гена РН05 определяется концентрацией неорганического фосфата в среде и контролируется белками активаторами Pho4p, Pho2p, циклин-киназным комплексом Pho80p- Pho85p и ингибитором киназы PhoSlp.

В настоящей работе показано, что экспрессия гена РНО5 зависит от качества источника азота в среде. Штамм УМ954 (MATaade2-101,ura3-32, his3-200, Ieu2-3J12, Iys2-801,leu2-3,112, trpl-901.) трансформировали плазмидами pTC8 и pTLl, созданными ранее на основе вектора pJDB207 и несущими ген ADE2 под контролем промоторов РНО5 и РНОЗ, соответственно. Уровень экспрессии РНОЗ и РНОЗ оценивали качественно по росту трансформантов на среде без аденина и лейцина. Трансформанты высевали на среды без аденина и лейцина с различными источниками азота - сульфатом аммония, глутамином, глутаматом, мочевиной. При этом оказалось, что трансформанты, несущие плазмиду рТС8, не способны расти на среде с мочевиной. На их фоне были отобраны ревертанты Ure+, имеющие собственное фенотипическое проявление -«неспособность расти на глутамате.

Проведен гибридологический анализ супрессоров и анализ промоторной области гена РН05. позволяют предположить, что мутации возникли в гене GLN3, кодирующем структуру белка-активатора азотного метаболизма. Предложена модель, согласно которой на среде с плохим источником азота - мочевиной, активатор Gln3p конкурирует с активатором Pho4p за связывание с промотором гена РНО5 и функционирует как репрессор.

 

Савинов В.А, Физикова А.Ю., Самбук Е.В.

Лаборатория биохимической генетики Биологического научно-исследовательского института СПбГУ, Санкт-Петербург, (Россия)