Вы здесь

Главная

Фотоаффинная модификация белков в ядерном экстракте

ID_Статьи: 
90.00

Бинарная система фотоаффинных реагентов была предложена ранее для вы­сокоселективного мечения ДНК-полимераз 5'-[32Р]-ДНК-праймерами. В настоя­щей работе показана возможность использования этого подхода для модификации ДНК-полимераз, участвующих в процессе эксцизионной репарации оснований (BER), на уровне ядерного экстракта, выделенного из семенников крупного рога­того скота. Фотоактивные пробы получали под действием ферментов ядерного экстракта из радиоактивно меченного олигонуклеотида, содержащего АР-сайт, в присутствии одного из аналогов dNTP - FAB-ddUTР или FAB-dCTP. Фотоактив­ную 2,3,5,6-тетрафтор-4-азидобензоильную (FAB) группу облучали светом с дли­ной волны 334-365 нм (прямое мечение) либо 365-450 нм в присутствии сен­сибилизатора ~ аналога dTTP, содержащего остаток пирена (Руг-6-dUTP). При ис­пользовании бинарной системы фотоаффинных реагентов FAB-группа активиру­ется светом только в составе комплекса реагент-ДНК-пЬлимераза-Руг-6-dUTP посредством переноса энергии (электрона) от сенсибилизатора, локализованного в dNTP-связывающем центре ДНК-полимеразы. Главным продуктом сенсибили­зированной модификации в ядерном экстракте фотореакционноспособными BER интермедиатами была ДНК-полимераза b. При использовании прямого мечения наблюдалась модификация множества других белков.

 

Лебедева Н.А., Речкунова Н.И., Суханова М.В., Ходырева С.Н., Лаврик С.И.

Новосибирский институт биоорганической химии СО РАН, Новосибирск