Вы здесь

Главная

Фосфорилирование in vivo и in vitro РНК-полимеразы III человека

ID_Статьи: 
114.00

Разработан метод выделения и очистки ДНК-зависимой РНК-полимеразы III из ядер клеток эпидермоидной карциномы человека А431. Было получено две субфракции фермента, различающиеся по плавучей плотности при ультрацент­рифугировании в градиенте концентрации глицерина и по электрофоретичес-кой подвижности в ПАА геле в нативных условиях. Как нами было показано ранее, с двумя субфракциями РНК-полимеразы III из ядер плаценты человека соочищается протеинкиназная активность, способная фосфорилировать полиме-разу in vitro. Методом иммуноблоттинга было показано, что данная протеинки-наза не является МАР-киназой, и, как показал ингибиторный анализ, с большой долей вероятности относится к семейству инозитолфосфат-3-киназ. В составе препарата РНК-полимеразы III из ядер клеток А431 протеинкиназная активность не присутствует. Мы исследовали фосфорилирование in vivo по тирозину инди­видуальных субъедикиц субфракций РНК-полимераз III из плаценты и из линии клеток А431 человека. Методом иммуноблоттинга с антителами против фос-фотирозина показано, что в составе'субфракции РНК-полимеразы IIIа плаценты человека и субфракции РНК-полимеразы Шб клеток А431 фосфорилированы по тирозину субъединицы с молекулярной массой около 97 kDa. Фосфорилирова­ние РНК-полимеразы IIIа плаценты человека in vitro не приводило к изменению интенсивности фосфорилирования по тирозину субъединицы 97 kDa и к появ­лению дополнительных субъединиц, фосфорилированных по тирозину in vitro. Таким образом, фосфорилирование по тирозину РНК-полимеразы III осуществ­ляется in vivo тирозинкиназой, не входящей в состав соочищающейся с фер­ментом протеинкиназной активности.

 

Никитина Т.В., Гудзик К.А.1, Перова А.А.2, Тищенко Л.И.1, Медведева Н.Д.3, Седо­ва В.М.3

1 Санкт-Петербургский государственный университет, Санкт-Петербург

2 Санкт-Петербургский государственный технический университет, Санкт-Петербург

3 Институт цитологии РАН, Санкт-Петербург