Вы здесь

Главная

Экспрессия универсального активатора транскрипции эукариот GAL4 в эмбрионах и первичных клеточных культурах морского ежа Scaphechinus mirabilis

ID_Статьи: 
65.00

Первичные культуры клеток морских беспозвоночных широко используются в эмбриологии, молекулярной и клеточной биологии. Однако для решения мно­гих задач вирусологии и биотехнологии требуются постоянные линии клеток этих животных с высоким потенциалом роста. Мы попытались изменить сте­пень экспрессии генов ростовых факторов в эмбриональных клетках морского ежа и, тем самым, увеличить их пролиферативную активность. Для этого эмбри­оны и эмбриональные клетки морского ежа трансфецировали плазмидой, содер­жащей ген gal4. Белок, кодируемый этим геном, является активатором транс­крипции эукариот (Ma et al, 1988). Промоторы генов ростовых факторов морс­ких ежей содержат мотив, с которым может связываться этот белок, активируя экспрессию генов. Мы использовали генно-инженерную конструкцию рМА563 (Ptashne, 1986) и в качестве контроля плазмиду, не имеющую активирующего домена (рМА564). Эмбрионы морского ежа на стадии двух бластомеров и дис­социированные клетки бластулы были трансформированы в присутствии по-лиэтиленгликоля. Через 60 часов после трансформации у 40% эмбрионов по­являлись «опухолеподобные» образования, которые отсутствовали у контрольных эмбрионоз и крайне редко встречались у эмбрионов, обработанных рМА564. Встраивание плазмидной ДНК и ее экспрессия были доказаны геноспецифи-ческим ПЦР и ОТПЦР. Трансфекция эмбриональных клеток морского ежа рМА563 приводила к увеличению синтеза ДНК и пролиферативной активнос­ти. В контроле число клеток не увеличивалось. Мы предполагаем, что быстрый рост «опухолеподобных» образований трансформированных эмбрионов и кле­ток в первичных культурах обусловлен действием гена gal4.

 

 

Киселев К.В.1, Одинцова Н.А.2, Плотников С.В.2, Булгаков В.П.3 'Дальневосточный государственный университет, Владивосток

2 Институт биологии моря ДВО РАН, Владивосток

3 Биолого-почвенный институт ДВО РАН, Владивосток